拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶（AtRZF1）的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现，AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术（原理如下图所示）将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是（　　）

1. 用PCR检测某转基因植株是否导入目的基因时，电泳鉴定时发现扩增出多条条带，其原因最可能是（）

A. 引物长度过短 B. 引物之间发生配对 C. 体系中Mg²⁺浓度过低 D. 电泳时凝胶浓度过高

单选题容易

2. PCR反应一般需要加入2种引物，引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是（）

A. 能够与两条模板链结合 B. 2种引物之间能碱基互补配对 C. 一段单链核酸 D. 引物长度通常为20～30个核苷酸

单选题容易

3. 利用PCR 获得目的基因后，用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到重组基因表达载体，其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是（　　）

A. 通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 B. 检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1 和引物4进行PCR C. 若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高 PCR 复性的温度 D. DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸

单选题容易

1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病，可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样，处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化，酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是（）

A. 1号和6号 B. 2号和4号 C. 3号和5号 D. 1号、2号、4号和6号

单选题普通

2. 酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶（LDH）基因导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是（）

A. 构建基因表达载体时，需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶 B. 若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因，则被破坏的磷酸二酯键共有4个 C. 用PCR技术扩增LDH基因时，变性后需要先升温后降温 D. 用PCR技术扩增LDH基因时，图中的2、3分别是两种引物结合的位置

单选题普通

3. 利用PCR技术检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水，进行PCR时加入的模板DNA如图所示。以下据此作出的分析，不合理的是（　　）

A. PCR产物的分子大小在250~500bp之间 B. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 C. 10号确定反应体系等对结果没有干扰 D. 3号样品为不含目的基因的载体DNA

单选题普通

1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如下图所示。下列说法错误的是（）

A. 对基因B进行PCR 需至少进行3次循环，才能获得含引物3且双链等长的DNA B. 若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因，需要设计6种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种 C. 将第一阶段的产物（图中ab和cd）混合，先变性再复性，使能够互补配对的DNA单链相互结合，理论上有4种结合的可能，其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种 D. 引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对，因此二者不能共存于同一PCR体系中

单选题普通

2. Sanger测序法是第一代基因测序方法，测序原理如图所示，其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸，其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是（）

A. 被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3' B. ddNTP可以连接到延伸的子链中，但此后子链将无法延伸 C. 合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中 D. 电泳结果共出现了12条长短不同的条带，但被测模板实际碱基数要超过12个

多选题困难

1. 研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为引物a精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。

(1) 欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，推测对应的基因碱基序列，对融合基因1进行获得融合基因2（如图）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，并标明每条链的5'端和3'端。

(2) 上方框内的序列延伸完成之后，后续对突变基因进行扩增，应选择的引物为图中的。

(3) ）对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：

i：在29℃收集雄性果蝇（G₀）。

ii：G₀与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G₁）

iii：将每对亲本的受精卵（G₁）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G₁具有cs效应。

iv：在℃继续培养具有cs效应的G₁果蝇，使之连续多代相互交配，得到转基因纯合子。

实验探究题困难

2. 丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域，兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。下图为部分过程，表为部分限制酶识别序列及切割位点。

限制性内切核酸酶	BamHⅠ	XhoⅠ	BclⅠ	SacⅠ
识别序列及切割位点	5'-C↓GATCG-3'	5'-C↓TCGAG-3'	5'-↓GATC-3'	5'-GAGCT↓C-3'

(1) 扩增X基因时，PCR反应中需要使用加入的材料有。（编号选填）

①解旋酶②耐热的DNA聚合酶③特异性引物④DNA模版链⑤脱氧核苷三磷酸底物⑥DNA编码链

(2) 为获得重组质粒，可在X基因两端添加。（编号选填）

①XhoⅠ和BclⅠ的识别序列②SacⅠ和BclⅠ的识别序列③XhoⅠ和BamHⅠ的识别序列④SacⅠ和BamHⅠ的识别序列

(3) 重组质粒转化入大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上．在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是。

(4) 实验发现，大肠杆菌培养基中pH偏低，分析原因可能是______。 A. 碳源不足 B. 杂菌发酵 C. 氮源过多 D. 无机盐过少

(5) 兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g·L^-1和15g·L^-1 ，在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90g·L^-1、100g·L^-1、110g·L^-1）和酵母粉（12g·L^-1、15g·L^-1 ， 18g·L^-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置（填数字）组实验（重复组不计算在内）。

(6) 研究发现，将X基因编码组氨酸定点突变为酪氨酸可提高丁二醇的产量．已知X基因编码链第468-488位碱基序列为5'-GATACA…GGACATGGG…ACGAAT-3'。为实现上述突变，应设计的引物序列是。（编号选填）（组氨酸：CAU、CAC 酪氨酸：UAU、UAC）

①3'-CTATGT-5' ②5'-GGATATGGG-3' ③3'-GATACA-5'④3'-GGAATAGGG-5'⑤5'-ATTCGT-3'⑥5'-CCCATATCC-3'⑦5'-GATAGA-3' ⑧3'-CCTTATGGG-5'

(7) 除采用PCR技术获得单碱基突变基因外，还可以对上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因？阐述理由。

综合题困难

3. 利用乳酸菌构建表达抗原蛋白的工程菌是研究抗原应用的重要手段之一。口服的乳酸菌可在消化道内定植存活，其表达的抗原蛋白可锚定于细胞表面（穿过细胞膜展示在细胞表面），诱导机体产生免疫反应。科学家将某病毒抗原蛋白的部分编码序列（RBD）拼接成融合基因2RBD和3RBD，探究RBD的二聚体蛋白和三聚体蛋白能否模拟抗原蛋白中RBD的天然构象并获得高效免疫原性。重组质粒构建流程如图1所示，Nco I和Sac I是pNZ8149质粒上的限制酶识别位点，U-M为信号肽-细胞壁锚定蛋白序列。回答下列问题：

(1) 为满足乳酸菌生长的特殊需求，培养基除了提供碳源、氮源、水和无机盐外，还需要添加，并在（填“有氧”或“无氧”）的环境条件下培养。

(2) 拼接形成的融合基因不具备限制酶切割位点，利用PCR技术对融合基因进行扩增时，所用两种引物的5'端应分别添加序列，以实现融合基因定向插入质粒。

(3) 为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒双酶切处理后电泳，结果如图2，泳道1为双酶切pNZ8149-2RBD，泳道2为双酶切pNZ8149-3RBD。泳道1两个条带大小分别为2507bp和2020bp，由此可知，融合基因3RBD的长度为bp，泳道2呈现一个条带的原因是。

(4) 实验成功构建了表达融合蛋白的重组乳酸菌，结果发现，在蛋白表达量和稳定性相同的情况下，pNZ8149-2RBD菌株表面二聚体蛋白的含量比pNZ8149-3RBD菌株表面三聚体蛋白多，该现象说明。

综合题困难

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易