PCR反应一般需要加入2种引物，引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是（）

1. 利用PCR 获得目的基因后，用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到重组基因表达载体，其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是（　　）

A. 通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 B. 检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1 和引物4进行PCR C. 若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高 PCR 复性的温度 D. DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸

单选题容易

2. 聚合酶链式反应（PCR）能实现对相应核苷酸序列的大量复制，相关叙述正确的是（）

A. 该技术需要用到引物、脱氧核苷酸、解旋酶等 B. 复性是为了使解旋后的两条链恢复双螺旋结构 C. PCR的产物通常用抗原－抗体杂交技术进行鉴定 D. 为激活相应酶，PCR反应缓冲液中需加入Mg²⁺

单选题容易

3. 科学家常用PCR特异性地快速扩增目的基因，PCR反应需要在一定的缓冲液中进行，需要提供DNA母链、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA 聚合酶和2种引物。下列相关叙述错误的是（）

A. DNA母链：提供DNA 复制的模板 B. 4 种脱氧核苷酸：合成DNA 子链的原料 C. 耐高温的 DNA 聚合酶：打开 DNA 双链并延伸DNA子链 D. 2种引物：使DNA 聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸

单选题容易

1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病，可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样，处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化，酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是（）

A. 1号和6号 B. 2号和4号 C. 3号和5号 D. 1号、2号、4号和6号

单选题普通

2. 拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶（AtRZF1）的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现，AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术（原理如下图所示）将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是（　　）

A. RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用 B. 图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA C. 图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种 D. 融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温

单选题困难

3. 酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶（LDH）基因导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是（）

A. 构建基因表达载体时，需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶 B. 若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因，则被破坏的磷酸二酯键共有4个 C. 用PCR技术扩增LDH基因时，变性后需要先升温后降温 D. 用PCR技术扩增LDH基因时，图中的2、3分别是两种引物结合的位置

单选题普通

1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如下图所示。下列说法错误的是（）

A. 对基因B进行PCR 需至少进行3次循环，才能获得含引物3且双链等长的DNA B. 若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因，需要设计6种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种 C. 将第一阶段的产物（图中ab和cd）混合，先变性再复性，使能够互补配对的DNA单链相互结合，理论上有4种结合的可能，其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种 D. 引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对，因此二者不能共存于同一PCR体系中

单选题普通

2. Sanger测序法是第一代基因测序方法，测序原理如图所示，其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸，其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是（）

A. 被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3' B. ddNTP可以连接到延伸的子链中，但此后子链将无法延伸 C. 合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中 D. 电泳结果共出现了12条长短不同的条带，但被测模板实际碱基数要超过12个

多选题困难

1. 小麦是我国重要的粮食作物之一，也是盐碱地开发利用的主要作物之一、研究表明，在盐碱条件下小麦的产量损失会超过60%。为了研究小麦耐盐基因TaHKT1（用A基因表示）控制的耐盐性状，研究人员利用基因工程构建了A基因超量表达的转基因小麦。回答下列问题：

(1) 对A基因进行PCR扩增时，应选择图1中的引物，进行图1过程时应将温度控制为左右。

(2) 强启动子是一段有特殊序列的DNA片段，能被识别并结合，驱动基因的。图2表示A基因与强启动子连接在一起得到的片段，据此推测构建该片段时，切割强启动子和A基因时均用到的限制酶为，并用将二者连接在一起得到图示片段，将该片段继续与图2中的Ti质粒相连时，应将其插入T-DNA中，原因是，应选择限制酶对该DNA片段和Ti质粒进行切割。

(3) 为了检测A基因超量表达对小麦耐盐性状的影响，应如何设计实验？请写出实验思路。。

综合题普通

2. 驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。研究者利用来源于T7噬菌体的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子PBAD（被工程菌RNA聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被有活性的T7RNAP识别）。回答下列问题：

(1) 用PCR技术扩增基因1、2、3时，所用的引物越短，引物特异性越（填“高”或“低”）PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶，原因是。

(2) 为实现蓝光控制染色，启动子①②③依次为、、（填“PBAD”或“PT7”），理由是。

(3) 将上述光控表达载体导入驹形杆菌的方法是。

(4) 光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为。

(5) 根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是。

综合题困难

3. 种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选，得到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，长度仍为150bp，据此推测突变体的表型与其有关，根据相关实验回答下列问题：

(1) 拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，用PCR反应扩增DAI基因，在PCR反应体系中需加入缓冲液（含Mg²⁺）、引物、原料、含DAI基因的DNA模板以及。设计引物时，为了确保扩增的DAI基因能和Ti质粒连接起来，需要考虑DAI基因两端具有序列。将构建好的基因表达载体与用处理后的处于感受态的农杆菌混合培养。

(2) 若突变体的表型确实与DAI基因的隐性突变有关，则导入野生型DAI基因的植株种子大小应与植株的种子大小相近。

(3) 转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，最终获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。

①农杆菌T-DNA在携带DAl基因的同时还携带卡那霉素抗性基因的目的是。

②农杆菌转化T₀代植株自交，将T₁代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长即阳性个体。T₁代阳性植株自交所得的T₂代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约%的培养基中幼苗继续培养。

③将②中选出的T₂代阳性植株（填“自交”“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T₃代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到%的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增与该突变相关的野生型和突变型基因片段（如图）。研究者同时扩增了从②中选出的T₂代阳性植株细胞中的该突变相关基因片段，然后用限制性核酸内切酶X切割（图中省略碱基序列中无酶X识别位点），可获得长度为bp的DNA片段。

综合题容易

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易