(1) 欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，推测对应的基因碱基序列，对融合基因1进行获得融合基因2（如图）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，并标明每条链的5'端和3'端。

(2) 上方框内的序列延伸完成之后，后续对突变基因进行扩增，应选择的引物为图中的。 (3) ）对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：

i：在29℃收集雄性果蝇（G₀）。

ii：G₀与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G₁）

iii：将每对亲本的受精卵（G₁）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G₁具有cs效应。

iv：在℃继续培养具有cs效应的G₁果蝇，使之连续多代相互交配，得到转基因纯合子。

(1) 扩增X基因时，PCR反应中需要使用加入的材料有。（编号选填）

①解旋酶②耐热的DNA聚合酶③特异性引物④DNA模版链⑤脱氧核苷三磷酸底物⑥DNA编码链

(2) 为获得重组质粒，可在X基因两端添加。（编号选填）

①XhoⅠ和BclⅠ的识别序列②SacⅠ和BclⅠ的识别序列③XhoⅠ和BamHⅠ的识别序列④SacⅠ和BamHⅠ的识别序列

(3) 重组质粒转化入大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上．在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是。 (4) 实验发现，大肠杆菌培养基中pH偏低，分析原因可能是______。 A. 碳源不足 B. 杂菌发酵 C. 氮源过多 D. 无机盐过少 (5) 兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g·L^-1和15g·L^-1 ， 在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90g·L^-1、100g·L^-1、110g·L^-1）和酵母粉（12g·L^-1、15g·L^-1 ， 18g·L^-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置（填数字）组实验（重复组不计算在内）。 (6) 研究发现，将X基因编码组氨酸定点突变为酪氨酸可提高丁二醇的产量．已知X基因编码链第468-488位碱基序列为5'-GATACA…GGACATGGG…ACGAAT-3'。为实现上述突变，应设计的引物序列是。（编号选填）（组氨酸：CAU、CAC   酪氨酸：UAU、UAC）

①3'-CTATGT-5' ②5'-GGATATGGG-3' ③3'-GATACA-5'④3'-GGAATAGGG-5'⑤5'-ATTCGT-3'⑥5'-CCCATATCC-3'⑦5'-GATAGA-3'   ⑧3'-CCTTATGGG-5'

(7) 除采用PCR技术获得单碱基突变基因外，还可以对上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因？阐述理由。

(1) 为满足乳酸菌生长的特殊需求，培养基除了提供碳源、氮源、水和无机盐外，还需要添加，并在（填“有氧”或“无氧”）的环境条件下培养。 (2) 拼接形成的融合基因不具备限制酶切割位点，利用PCR技术对融合基因进行扩增时，所用两种引物的5'端应分别添加序列，以实现融合基因定向插入质粒。 (3) 为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒双酶切处理后电泳，结果如图2，泳道1为双酶切pNZ8149-2RBD，泳道2为双酶切pNZ8149-3RBD。泳道1两个条带大小分别为2507bp和2020bp，由此可知，融合基因3RBD的长度为bp，泳道2呈现一个条带的原因是。 (4) 实验成功构建了表达融合蛋白的重组乳酸菌，结果发现，在蛋白表达量和稳定性相同的情况下，pNZ8149-2RBD菌株表面二聚体蛋白的含量比pNZ8149-3RBD菌株表面三聚体蛋白多，该现象说明。

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度