1.
丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域，兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。下图为部分过程，表为部分限制酶识别序列及切割位点。
限制性内切核酸酶 | BamHⅠ | XhoⅠ | BclⅠ | SacⅠ |
识别序列及切割位点 | 5'-C↓GATCG-3' | 5'-C↓TCGAG-3' | 5'-↓GATC-3' | 5'-GAGCT↓C-3' |
(1)
扩增X基因时，PCR反应中需要使用加入的材料有。（编号选填）
(2)
为获得重组质粒，可在X基因两端添加。（编号选填）
(3)
重组质粒转化入大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上．在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是。
(4)
实验发现，大肠杆菌培养基中pH偏低，分析原因可能是______。
A.
碳源不足
B.
杂菌发酵
C.
氮源过多
D.
无机盐过少
(5)
兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g·L-1和15g·L-1 ， 在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90g·L-1、100g·L-1、110g·L-1）和酵母粉（12g·L-1、15g·L-1 ， 18g·L-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置（填数字）组实验（重复组不计算在内）。
(6)
研究发现，将X基因编码组氨酸定点突变为酪氨酸可提高丁二醇的产量．已知X基因编码链第468-488位碱基序列为5'-GATACA…GGACATGGG…ACGAAT-3'。为实现上述突变，应设计的引物序列是。（编号选填）（组氨酸：CAU、CAC 酪氨酸：UAU、UAC）
(7)
除采用PCR技术获得单碱基突变基因外，还可以对上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因？阐述理由。
①解旋酶②耐热的DNA聚合酶③特异性引物④DNA模版链⑤脱氧核苷三磷酸底物⑥DNA编码链
①XhoⅠ和BclⅠ的识别序列②SacⅠ和BclⅠ的识别序列③XhoⅠ和BamHⅠ的识别序列④SacⅠ和BamHⅠ的识别序列
①3'-CTATGT-5' ②5'-GGATATGGG-3' ③3'-GATACA-5'④3'-GGAATAGGG-5'⑤5'-ATTCGT-3'⑥5'-CCCATATCC-3'⑦5'-GATAGA-3' ⑧3'-CCTTATGGG-5'
【考点】
PCR技术的基本操作和应用;
基因工程的操作程序（详细）;
能力提升
真题演练
