1. 普通PCR在扩增DNA的过程中存在一定概率的碱基错误配对，得到部分的错误产物。巢式PCR是一种在普通PCR基础上改良的新型PCR技术，扩增的精确性比普通PCR更高。巢式PCR对目标DNA进行扩增时需要用到两对不同的引物，首先使用第一对引物（外引物）对目标DNA进行第一次扩增得到中间产物，然后使用第二对引物（内引物）对中间产物进行第二次扩增得到目标产物，过程如图所示。请回答相关问题：

2. 2022年12月7日，疫情防控“新十条”发布，从此，全员核酸检测成为了历史。核酸检测报告单结果分为检出和未检出，即阳性和阴性。RT-PC℉检测大规模应用于新冠感染筛查中。其检测流程包括核酸提取、扩增、数据处理及报告，整个流程需4小时或更长时间，其速度快、操作流程简单、满足大规模的筛查以快速获得新型冠状病毒核酸是否为阳性的初步证据。RT-PCR加入Taqman荧光探针可以通过测定荧光强度来检测产物浓度，原理如下：Taqman荧光探针为一段与目的基因互补的核苷酸单链，两端分别连接一个荧光基团R和一个淬灭基团Q。探针结构完整时，R发射的荧光被Q吸收；而PCR扩增时结合在模板链上的探针被切断，使R和Q分离，R基团发射的荧光不被淬灭，这样通过对荧光信号强弱的监测就可实现对产物的检测。荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明扩增次数少，获得的核酸产物含有病毒的概率越大。测某基因的C值是指将某目的基因与过量的荧光素混合后放入PCR反应体系中，随PCR产物的积累，将荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数称为Ct值。不同的样本，数值不同。请回答下列问题：

步骤		温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃	10min	1cycle
2	预变性	95℃	5min	1cycle
3	变性	95℃	10s	40cycle
	退火/延伸/检测荧光	55℃	40s

3. 在聚合酶链式反应（PCR）中，除了作为复制对象的长链DNA之外，反应溶液中还添加有作为引物的短链DNA、dNTP（脱氧三磷酸核苷酸，N表示任意某一种碱基）和酶。实验时需要使反应溶液的温度周期性地发生变化以完成“变性—复性—延伸”的循环。DNA复性温度与互补碱基对之间的氢键数呈正相关。