某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

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1. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

【考点】

PCR技术的基本操作和应用;

【答案】

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单选题容易

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

真题演练

换一批

1. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来

单选题容易

1. 为研究拟南芥植株E基因的功能，科研人员将T-DNA插入到E基因中，导致其发生突变，突变后的基因记为e。为验证某拟南芥植株的基因型，科研人员根据基因E和T-DNA的序列，设计了三种引物，引物的结合位置如图所示。已知完整的E基因和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增。科研人员提取该植株的总DNA，分别用引物“I+III”组合及“II+III”组合进行PCR，两种引物组合均能完成扩增。拟南芥植株的基因型为（）

A. Ee B. EE C. ee D. EE或Ee

单选题困难

2. 新冠疫情的快速控制，离不开政府的科学决策和我国对新冠病毒（RNA病毒）的快速检测能力。荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量，其原理是：在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成（如右图）。Ct值（循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。下列说法不正确的是（）

A. 检测新冠病毒时，需加入逆转录酶将新冠病毒RNA转化为cDNA B. PCR每个循环包括变性、退火（引物和模板结合）、延伸3个阶段 C. C_t值就越大表示被检测样本中病毒数目越多，患者危险性更高 D. 若样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解，检测结果可能为阴性

单选题普通

3. 某校学习小组进行PCR实验，甲、乙、丙三名同学分别以酵母菌为材料，进行PCR扩增，各取20ul产物进行凝胶电泳，得到的结果如下图。下列叙述错误的是（）

A. 凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱 B. 甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多 C. 丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样 D. 丙同学扩增得到的片段比甲乙同学的要大

单选题普通

1. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补酸对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧原苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G

多选题普通

2. 免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（）

A. 图示中的DNA可以是非牛乳基因中的DNA片段 B. 如果第三次冲洗不充分则有可能出现假阳性现象 C. 电泳检测结果只能判断阳性与否，无法判断牛乳中抗生素的含量 D. 微量抗原抗体反应通过PCR技术间接扩增放大，从而达到可检测的水平

多选题困难

3. 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（）

A. 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高 B. 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中 C. 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子 D. 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制

多选题普通

1. 苹果生长过程中易受真菌感染，科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中，该基因控制合成的β-1，3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时，应选择下图中的引物（填序号），引物的作用是。

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒，用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后，二者可连接在一起构成重组质粒，原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列，PCR时可在引物（填序号）的（填“3”或“5”）端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列，其参与构成的复合启动子的作用是：①，②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因，只能在导入真核细胞后正确表达，而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中，GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca²⁺处理后的农杆菌共培养，然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌，再将其与苹果外植体共培养进行转化，通过（写出筛选过程），从而获得成功转化的受体细胞。

综合题普通

2. 研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为引物a精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。

(1) 欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，推测对应的基因碱基序列，对融合基因1进行获得融合基因2（如图）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，并标明每条链的5'端和3'端。

(2) 上方框内的序列延伸完成之后，后续对突变基因进行扩增，应选择的引物为图中的。

(3) ）对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：

i：在29℃收集雄性果蝇（G₀）。

ii：G₀与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G₁）

iii：将每对亲本的受精卵（G₁）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G₁具有cs效应。

iv：在℃继续培养具有cs效应的G₁果蝇，使之连续多代相互交配，得到转基因纯合子。

实验探究题困难

3. 我国玉米的生产一直受到虫害的严重影响，其中鳞翅目害虫亚洲玉米螟对我国玉米生产的危害较为显著。通过基因工程育种，将抗虫基因crylAb13转入玉米，能够显著提高玉米对玉米螟的抗性。过程如图1所示，其中基因Bar为抗除草剂基因。回答下列问题：

(1) 根据基因表达载体的结构推测，抗除草剂基因Bar的作用是。基因cry1Ab13必须插入Ti质粒的T-DNA中，原因是。

(2) 为了减少限制酶识别序列的影响，研究人员利用无缝克隆In=Fusion技术实现过程②目的。原理如图2所示。利用限制酶将表达载体线性化。过程①利用技术获取基因crylAb13，该过程中要在引物1和引物2的（填“3＇”或“5＇”）端增加对应表达载体中的片段。将线性化的表达载体和基因cry1Ab13混合进行In-Fusion反应，获得重组表达载体。

(3) 过程③利用构建好的重组表达载体转化经处理过的农杆菌，然后侵染玉米愈伤组织，进而获得转基因玉米植株。研究人员探究了农杆菌浓度对基因转化效率的影响，结果如图3所示。实验结果表明，转化效率较高的农杆菌浓度范围为OD600。为了进一步对侵染条件进行优化，可进行实验探究的课题是。

综合题普通

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 我国考古学家利用现代人的 DNA 序列设计并合成了一种类似磁铁的“引子”，成功将极其微量的古人类 DNA 从提取自土壤沉积物中的多种生物的 DNA 中识别并分离出来，用于研究人类起源及进化。下列说法正确的是（）

A. “引子”的彻底水解产物有两种 B. 设计“引子”的 DNA 序列信息只能来自核 DNA C. 设计“引子”前不需要知道古人类的 DNA 序列 D. 土壤沉积物中的古人类双链 DNA 可直接与“引子”结合从而被识别

单选题普通