1. 苹果生长过程中易受真菌感染,科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中,该基因控制合成的β-1,3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁,从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题:
(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时,应选择下图中的引物(填序号),引物的作用是

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒,用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后,二者可连接在一起构成重组质粒,原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列,PCR时可在引物(填序号)的(填“3”或“5”)端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列,其参与构成的复合启动子的作用是:①,②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因,只能在导入真核细胞后正确表达,而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中,GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca2+处理后的农杆菌共培养,然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌,再将其与苹果外植体共培养进行转化,通过(写出筛选过程),从而获得成功转化的受体细胞。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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