免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（）

1. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补酸对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧原苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G

多选题普通

2. 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（）

A. 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高 B. 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中 C. 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子 D. 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制

多选题普通

3. 利用重叠延伸PCR技术进行定点突变可以实现对纤维素酶基因进行合理性改造，其过程如下图所示。下列分析正确的是（）

A. PCR1过程中的产物AB是依赖引物a和引物b扩增的结果 B. 引物c和引物b上均含有与模板链不能互补的碱基 C. ①过程需要先加热至90～95℃后再冷却至55～60℃ D. ②过程需要利用引物a和引物d获得突变产物AD

多选题普通

1. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来

单选题容易

2. 为研究拟南芥植株E基因的功能，科研人员将T-DNA插入到E基因中，导致其发生突变，突变后的基因记为e。为验证某拟南芥植株的基因型，科研人员根据基因E和T-DNA的序列，设计了三种引物，引物的结合位置如图所示。已知完整的E基因和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增。科研人员提取该植株的总DNA，分别用引物“I+III”组合及“II+III”组合进行PCR，两种引物组合均能完成扩增。拟南芥植株的基因型为（）

A. Ee B. EE C. ee D. EE或Ee

单选题困难

3. 新冠疫情的快速控制，离不开政府的科学决策和我国对新冠病毒（RNA病毒）的快速检测能力。荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量，其原理是：在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成（如右图）。Ct值（循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。下列说法不正确的是（）

A. 检测新冠病毒时，需加入逆转录酶将新冠病毒RNA转化为cDNA B. PCR每个循环包括变性、退火（引物和模板结合）、延伸3个阶段 C. C_t值就越大表示被检测样本中病毒数目越多，患者危险性更高 D. 若样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解，检测结果可能为阴性

单选题普通

1. 研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为引物a精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。

(1) 欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，推测对应的基因碱基序列，对融合基因1进行获得融合基因2（如图）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，并标明每条链的5'端和3'端。

(2) 上方框内的序列延伸完成之后，后续对突变基因进行扩增，应选择的引物为图中的。

(3) ）对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：

i：在29℃收集雄性果蝇（G₀）。

ii：G₀与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G₁）

iii：将每对亲本的受精卵（G₁）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G₁具有cs效应。

iv：在℃继续培养具有cs效应的G₁果蝇，使之连续多代相互交配，得到转基因纯合子。

实验探究题困难

2. 丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域，兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。下图为部分过程，表为部分限制酶识别序列及切割位点。

限制性内切核酸酶	BamHⅠ	XhoⅠ	BclⅠ	SacⅠ
识别序列及切割位点	5'-C↓GATCG-3'	5'-C↓TCGAG-3'	5'-↓GATC-3'	5'-GAGCT↓C-3'

(1) 扩增X基因时，PCR反应中需要使用加入的材料有。（编号选填）

①解旋酶②耐热的DNA聚合酶③特异性引物④DNA模版链⑤脱氧核苷三磷酸底物⑥DNA编码链

(2) 为获得重组质粒，可在X基因两端添加。（编号选填）

①XhoⅠ和BclⅠ的识别序列②SacⅠ和BclⅠ的识别序列③XhoⅠ和BamHⅠ的识别序列④SacⅠ和BamHⅠ的识别序列

(3) 重组质粒转化入大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上．在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是。

(4) 实验发现，大肠杆菌培养基中pH偏低，分析原因可能是______。 A. 碳源不足 B. 杂菌发酵 C. 氮源过多 D. 无机盐过少

(5) 兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g·L^-1和15g·L^-1 ，在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90g·L^-1、100g·L^-1、110g·L^-1）和酵母粉（12g·L^-1、15g·L^-1 ， 18g·L^-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置（填数字）组实验（重复组不计算在内）。

(6) 研究发现，将X基因编码组氨酸定点突变为酪氨酸可提高丁二醇的产量．已知X基因编码链第468-488位碱基序列为5'-GATACA…GGACATGGG…ACGAAT-3'。为实现上述突变，应设计的引物序列是。（编号选填）（组氨酸：CAU、CAC 酪氨酸：UAU、UAC）

①3'-CTATGT-5' ②5'-GGATATGGG-3' ③3'-GATACA-5'④3'-GGAATAGGG-5'⑤5'-ATTCGT-3'⑥5'-CCCATATCC-3'⑦5'-GATAGA-3' ⑧3'-CCTTATGGG-5'

(7) 除采用PCR技术获得单碱基突变基因外，还可以对上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因？阐述理由。

综合题困难

3. 利用乳酸菌构建表达抗原蛋白的工程菌是研究抗原应用的重要手段之一。口服的乳酸菌可在消化道内定植存活，其表达的抗原蛋白可锚定于细胞表面（穿过细胞膜展示在细胞表面），诱导机体产生免疫反应。科学家将某病毒抗原蛋白的部分编码序列（RBD）拼接成融合基因2RBD和3RBD，探究RBD的二聚体蛋白和三聚体蛋白能否模拟抗原蛋白中RBD的天然构象并获得高效免疫原性。重组质粒构建流程如图1所示，Nco I和Sac I是pNZ8149质粒上的限制酶识别位点，U-M为信号肽-细胞壁锚定蛋白序列。回答下列问题：

(1) 为满足乳酸菌生长的特殊需求，培养基除了提供碳源、氮源、水和无机盐外，还需要添加，并在（填“有氧”或“无氧”）的环境条件下培养。

(2) 拼接形成的融合基因不具备限制酶切割位点，利用PCR技术对融合基因进行扩增时，所用两种引物的5'端应分别添加序列，以实现融合基因定向插入质粒。

(3) 为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒双酶切处理后电泳，结果如图2，泳道1为双酶切pNZ8149-2RBD，泳道2为双酶切pNZ8149-3RBD。泳道1两个条带大小分别为2507bp和2020bp，由此可知，融合基因3RBD的长度为bp，泳道2呈现一个条带的原因是。

(4) 实验成功构建了表达融合蛋白的重组乳酸菌，结果发现，在蛋白表达量和稳定性相同的情况下，pNZ8149-2RBD菌株表面二聚体蛋白的含量比pNZ8149-3RBD菌株表面三聚体蛋白多，该现象说明。

综合题困难

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易