关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

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1. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来

【考点】

PCR技术的基本操作和应用;

【答案】

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单选题容易

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1. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易

1. 为研究拟南芥植株E基因的功能，科研人员将T-DNA插入到E基因中，导致其发生突变，突变后的基因记为e。为验证某拟南芥植株的基因型，科研人员根据基因E和T-DNA的序列，设计了三种引物，引物的结合位置如图所示。已知完整的E基因和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增。科研人员提取该植株的总DNA，分别用引物“I+III”组合及“II+III”组合进行PCR，两种引物组合均能完成扩增。拟南芥植株的基因型为（）

A. Ee B. EE C. ee D. EE或Ee

单选题困难

2. 新冠疫情的快速控制，离不开政府的科学决策和我国对新冠病毒（RNA病毒）的快速检测能力。荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量，其原理是：在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成（如右图）。Ct值（循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。下列说法不正确的是（）

A. 检测新冠病毒时，需加入逆转录酶将新冠病毒RNA转化为cDNA B. PCR每个循环包括变性、退火（引物和模板结合）、延伸3个阶段 C. C_t值就越大表示被检测样本中病毒数目越多，患者危险性更高 D. 若样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解，检测结果可能为阴性

单选题普通

3. 某校学习小组进行PCR实验，甲、乙、丙三名同学分别以酵母菌为材料，进行PCR扩增，各取20ul产物进行凝胶电泳，得到的结果如下图。下列叙述错误的是（）

A. 凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱 B. 甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多 C. 丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样 D. 丙同学扩增得到的片段比甲乙同学的要大

单选题普通

1. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补酸对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧原苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G

多选题普通

2. 免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（）

A. 图示中的DNA可以是非牛乳基因中的DNA片段 B. 如果第三次冲洗不充分则有可能出现假阳性现象 C. 电泳检测结果只能判断阳性与否，无法判断牛乳中抗生素的含量 D. 微量抗原抗体反应通过PCR技术间接扩增放大，从而达到可检测的水平

多选题困难

3. 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（）

A. 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高 B. 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中 C. 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子 D. 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制

多选题普通

1. 小麦是我国重要的粮食作物之一，也是盐碱地开发利用的主要作物之一、研究表明，在盐碱条件下小麦的产量损失会超过60%。为了研究小麦耐盐基因TaHKT1（用A基因表示）控制的耐盐性状，研究人员利用基因工程构建了A基因超量表达的转基因小麦。回答下列问题：

(1) 对A基因进行PCR扩增时，应选择图1中的引物，进行图1过程时应将温度控制为左右。

(2) 强启动子是一段有特殊序列的DNA片段，能被识别并结合，驱动基因的。图2表示A基因与强启动子连接在一起得到的片段，据此推测构建该片段时，切割强启动子和A基因时均用到的限制酶为，并用将二者连接在一起得到图示片段，将该片段继续与图2中的Ti质粒相连时，应将其插入T-DNA中，原因是，应选择限制酶对该DNA片段和Ti质粒进行切割。

(3) 为了检测A基因超量表达对小麦耐盐性状的影响，应如何设计实验？请写出实验思路。。

综合题普通

2. 驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。研究者利用来源于T7噬菌体的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子PBAD（被工程菌RNA聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被有活性的T7RNAP识别）。回答下列问题：

(1) 用PCR技术扩增基因1、2、3时，所用的引物越短，引物特异性越（填“高”或“低”）PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶，原因是。

(2) 为实现蓝光控制染色，启动子①②③依次为、、（填“PBAD”或“PT7”），理由是。

(3) 将上述光控表达载体导入驹形杆菌的方法是。

(4) 光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为。

(5) 根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是。

综合题困难

3. 种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选，得到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，长度仍为150bp，据此推测突变体的表型与其有关，根据相关实验回答下列问题：

(1) 拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，用PCR反应扩增DAI基因，在PCR反应体系中需加入缓冲液（含Mg²⁺）、引物、原料、含DAI基因的DNA模板以及。设计引物时，为了确保扩增的DAI基因能和Ti质粒连接起来，需要考虑DAI基因两端具有序列。将构建好的基因表达载体与用处理后的处于感受态的农杆菌混合培养。

(2) 若突变体的表型确实与DAI基因的隐性突变有关，则导入野生型DAI基因的植株种子大小应与植株的种子大小相近。

(3) 转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，最终获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。

①农杆菌T-DNA在携带DAl基因的同时还携带卡那霉素抗性基因的目的是。

②农杆菌转化T₀代植株自交，将T₁代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长即阳性个体。T₁代阳性植株自交所得的T₂代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约%的培养基中幼苗继续培养。

③将②中选出的T₂代阳性植株（填“自交”“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T₃代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到%的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增与该突变相关的野生型和突变型基因片段（如图）。研究者同时扩增了从②中选出的T₂代阳性植株细胞中的该突变相关基因片段，然后用限制性核酸内切酶X切割（图中省略碱基序列中无酶X识别位点），可获得长度为bp的DNA片段。

综合题容易

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易