制备G品系斑马鱼。①获得GFP基因。方法一:可从库中获得GFP基因的序列信息,再通过人工合成的方法获得。方法二:以含GFP基因的质粒作为进行PCR,扩增得到大量GFP基因。
②制备重组质粒。将基因的启动子和GFP基因相连后,再与质粒相连。
③导入受体细胞。将重组质粒导入斑马鱼的受精卵,选择受精卵为受体细胞的原因是。
④筛选G品系斑马鱼。若在荧光显微镜下观察小鱼的各个器官时发现,表明成功得到G品系斑马鱼。
⑤筛选纯合G品系斑马鱼。鉴定GFP插入的位置,针对插入位点的上下游设计了引物1、2,针对GFP基因自身序列设计了引物3、4,各引物的位置如图1所示。将G品系斑马鱼相互交配,提取不同子代个体的DNA用引物1、2进行PCR并电泳,结果如图2所示。加样孔对应的个体是纯合G品系斑马鱼。若改用引物3、4进行PCR并电泳,加样孔对应的个体是纯合野生型斑马鱼。