1.
为验证pdx1蛋白是决定胰岛形成的最为关键的蛋白质。科研人员以斑马鱼为模式生物，先获得在胰岛区域特异性表达GFP（绿色荧光蛋白，可在荧光显微镜下观察到绿色荧光）的转基因斑马鱼（G品系斑马鱼）。特异性敲除G品系斑马鱼的pdx1基因，获得N品系斑马鱼。回答下列问题：
(1)
制备G品系斑马鱼。
(2)
制备N品系斑马鱼。CRISPR-Cas9技术能特异性敲除基因。制备针对pdx1基因的CRISPR-Cas9体系，采用的方法导入G品系斑马鱼的受精卵中。筛选获得了1个pdx1突变品系（N），PCR后进行，得到的序列如下图3所示（图中下划线表示替换，“-”表示缺失1个碱基）。预计突变品系N的pdx1蛋白含个氨基酸。（已知密码子：CCU-脯氨酸；UAA、UGA和UAG为终止密码子）
(3)
结果预测：荧光显微镜下观察N、G品系斑马鱼的荧光情况为。
(4)
分析与讨论：可通过构建pdx1-GFP融合蛋白实现对pdx1基因表达产物的定位。先依据pdx1-GFP融合蛋白的功能推断其氨基酸序列，进一步推断出其序列，再通过基因工程技术获得改造蛋白。这种获得改造蛋白的技术属于。
①获得GFP基因。方法一：可从库中获得GFP基因的序列信息，再通过人工合成的方法获得。方法二：以含GFP基因的质粒作为进行PCR，扩增得到大量GFP基因。
②制备重组质粒。将基因的启动子和GFP基因相连后，再与质粒相连。
③导入受体细胞。将重组质粒导入斑马鱼的受精卵，选择受精卵为受体细胞的原因是。
④筛选G品系斑马鱼。若在荧光显微镜下观察小鱼的各个器官时发现，表明成功得到G品系斑马鱼。
⑤筛选纯合G品系斑马鱼。鉴定GFP插入的位置，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对GFP基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图1所示。将G品系斑马鱼相互交配，提取不同子代个体的DNA用引物1、2进行PCR并电泳，结果如图2所示。加样孔对应的个体是纯合G品系斑马鱼。若改用引物3、4进行PCR并电泳，加样孔对应的个体是纯合野生型斑马鱼。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用;
蛋白质工程;
遗传信息的翻译;
基因工程的操作程序（详细）;