酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶（LDH）基因导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是（）

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1. 酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶（LDH）基因导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是（）

A. 构建基因表达载体时，需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶 B. 若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因，则被破坏的磷酸二酯键共有4个 C. 用PCR技术扩增LDH基因时，变性后需要先升温后降温 D. 用PCR技术扩增LDH基因时，图中的2、3分别是两种引物结合的位置

【考点】

PCR技术的基本操作和应用;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

真题演练

换一批

1. 用PCR检测某转基因植株是否导入目的基因时，电泳鉴定时发现扩增出多条条带，其原因最可能是（）

A. 引物长度过短 B. 引物之间发生配对 C. 体系中Mg²⁺浓度过低 D. 电泳时凝胶浓度过高

单选题容易

2. PCR反应一般需要加入2种引物，引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是（）

A. 能够与两条模板链结合 B. 2种引物之间能碱基互补配对 C. 一段单链核酸 D. 引物长度通常为20～30个核苷酸

单选题容易

3. 利用PCR 获得目的基因后，用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到重组基因表达载体，其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是（　　）

A. 通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 B. 检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1 和引物4进行PCR C. 若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高 PCR 复性的温度 D. DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸

单选题容易

1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病，可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样，处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化，酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是（）

A. 1号和6号 B. 2号和4号 C. 3号和5号 D. 1号、2号、4号和6号

单选题普通

2. 拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶（AtRZF1）的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现，AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术（原理如下图所示）将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是（　　）

A. RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用 B. 图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA C. 图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种 D. 融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温

单选题困难

3. 利用PCR技术检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水，进行PCR时加入的模板DNA如图所示。以下据此作出的分析，不合理的是（　　）

A. PCR产物的分子大小在250~500bp之间 B. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 C. 10号确定反应体系等对结果没有干扰 D. 3号样品为不含目的基因的载体DNA

单选题普通

1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如下图所示。下列说法错误的是（）

A. 对基因B进行PCR 需至少进行3次循环，才能获得含引物3且双链等长的DNA B. 若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因，需要设计6种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种 C. 将第一阶段的产物（图中ab和cd）混合，先变性再复性，使能够互补配对的DNA单链相互结合，理论上有4种结合的可能，其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种 D. 引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对，因此二者不能共存于同一PCR体系中

单选题普通

2. Sanger测序法是第一代基因测序方法，测序原理如图所示，其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸，其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是（）

A. 被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3' B. ddNTP可以连接到延伸的子链中，但此后子链将无法延伸 C. 合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中 D. 电泳结果共出现了12条长短不同的条带，但被测模板实际碱基数要超过12个

多选题困难

1. 苹果生长过程中易受真菌感染，科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中，该基因控制合成的β-1，3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时，应选择下图中的引物（填序号），引物的作用是。

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒，用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后，二者可连接在一起构成重组质粒，原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列，PCR时可在引物（填序号）的（填“3”或“5”）端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列，其参与构成的复合启动子的作用是：①，②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因，只能在导入真核细胞后正确表达，而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中，GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca²⁺处理后的农杆菌共培养，然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌，再将其与苹果外植体共培养进行转化，通过（写出筛选过程），从而获得成功转化的受体细胞。

综合题普通

2. 为探究藏系绵羊种欧拉羊的一对相对性状长绒和短绒的遗传规律，并揭示其在羊毛发育过程中的分子机制，研究人员进行了如下的实验。

(1) 研究人员在野生型的短绒欧拉羊的10号染色体的~1023kb至~1028kb区间设计连续的重叠引物，提取突变体和野生型的进行PCR扩增，结果如图所示。

据图可知分子量较小的扩增产物与点样处的距离较(填“远”或“近”)，推测10号染色体上第对引物对应的调控序列(简称M)是突变体长绒出现的根本原因。

(2) 为了进一步证实突变体的长绒表型与调控序列M密切相关，研究人员利用表型为长绒的突变体与表型为短线的野生型作为亲本进行杂交，统计F₁随机交配后代F₂的表型及比例为长绒：短绒=9：7，然后研究人员对F₂中长绒个体的细胞进行PCR扩增以检测短绒基因在突变型与野生型中的差别，扩增结果显示F₂中长绒个体中完全没有短绒基因的比例为。

(3) 研究人员从野生型和突变体中克隆出不同长度的DNA调控序列M后，运用基因工程技术分别导入到报告基因载体中，并将含有M序列的报告基因载体转染到细胞中，以检测M调控序列对启动子活性的影响，结果如图所示。

因此图中用报告基因的表达量/内参基因的表达量用来衡量的表达水平。实验结果说明突变体的调控序列M影响下游基因的表达，且其作用的发挥与调控序列M插入的有关。与此同时，研究人员还发现在欧拉羊野生型和突变体中，基因ASIC2的表达也会影响欧拉羊短绒的发育，但是检测发现突变体ASIC2蛋白结构与野生型一致。综合上述研究推测突变体长绒表型出现的原因是。

综合题困难

3. 研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为引物a精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。