利用PCR技术检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水，进行PCR时加入的模板DNA如图所示。以下据此作出的分析，不合理的是（　　）

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1. 利用PCR技术检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水，进行PCR时加入的模板DNA如图所示。以下据此作出的分析，不合理的是（　　）

A. PCR产物的分子大小在250~500bp之间 B. 9号样品对应植株不是所需的转基因植株 C. 10号确定反应体系等对结果没有干扰 D. 3号样品为不含目的基因的载体DNA

【考点】

PCR技术的基本操作和应用;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

真题演练

换一批

1. PCR反应一般需要加入2种引物，引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是（）

A. 能够与两条模板链结合 B. 2种引物之间能碱基互补配对 C. 一段单链核酸 D. 引物长度通常为20～30个核苷酸

单选题容易

2. 利用PCR 获得目的基因后，用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到重组基因表达载体，其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是（　　）

A. 通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 B. 检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1 和引物4进行PCR C. 若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高 PCR 复性的温度 D. DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸

单选题容易

3. 聚合酶链式反应（PCR）能实现对相应核苷酸序列的大量复制，相关叙述正确的是（）

A. 该技术需要用到引物、脱氧核苷酸、解旋酶等 B. 复性是为了使解旋后的两条链恢复双螺旋结构 C. PCR的产物通常用抗原－抗体杂交技术进行鉴定 D. 为激活相应酶，PCR反应缓冲液中需加入Mg²⁺

单选题容易

1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病，可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白，在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样，处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化，酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中，来自于氯喹抗性患者的是（）

A. 1号和6号 B. 2号和4号 C. 3号和5号 D. 1号、2号、4号和6号

单选题普通

2. 拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶（AtRZF1）的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现，AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术（原理如下图所示）将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是（　　）

A. RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用 B. 图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA C. 图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种 D. 融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温

单选题困难

3. 酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶（LDH）基因导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是（）

A. 构建基因表达载体时，需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶 B. 若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因，则被破坏的磷酸二酯键共有4个 C. 用PCR技术扩增LDH基因时，变性后需要先升温后降温 D. 用PCR技术扩增LDH基因时，图中的2、3分别是两种引物结合的位置

单选题普通

1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如下图所示。下列说法错误的是（）

A. 对基因B进行PCR 需至少进行3次循环，才能获得含引物3且双链等长的DNA B. 若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因，需要设计6种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种 C. 将第一阶段的产物（图中ab和cd）混合，先变性再复性，使能够互补配对的DNA单链相互结合，理论上有4种结合的可能，其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种 D. 引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对，因此二者不能共存于同一PCR体系中

单选题普通

2. Sanger测序法是第一代基因测序方法，测序原理如图所示，其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸，其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是（）

A. 被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3' B. ddNTP可以连接到延伸的子链中，但此后子链将无法延伸 C. 合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中 D. 电泳结果共出现了12条长短不同的条带，但被测模板实际碱基数要超过12个

多选题困难

1. 小麦是我国重要的粮食作物之一，也是盐碱地开发利用的主要作物之一、研究表明，在盐碱条件下小麦的产量损失会超过60%。为了研究小麦耐盐基因TaHKT1（用A基因表示）控制的耐盐性状，研究人员利用基因工程构建了A基因超量表达的转基因小麦。回答下列问题：

(1) 对A基因进行PCR扩增时，应选择图1中的引物，进行图1过程时应将温度控制为左右。

(2) 强启动子是一段有特殊序列的DNA片段，能被识别并结合，驱动基因的。图2表示A基因与强启动子连接在一起得到的片段，据此推测构建该片段时，切割强启动子和A基因时均用到的限制酶为，并用将二者连接在一起得到图示片段，将该片段继续与图2中的Ti质粒相连时，应将其插入T-DNA中，原因是，应选择限制酶对该DNA片段和Ti质粒进行切割。

(3) 为了检测A基因超量表达对小麦耐盐性状的影响，应如何设计实验？请写出实验思路。。

综合题普通

2. 驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。研究者利用来源于T7噬菌体的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子PBAD（被工程菌RNA聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被有活性的T7RNAP识别）。回答下列问题：

(1) 用PCR技术扩增基因1、2、3时，所用的引物越短，引物特异性越（填“高”或“低”）PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶，原因是。

(2) 为实现蓝光控制染色，启动子①②③依次为、、（填“PBAD”或“PT7”），理由是。

(3) 将上述光控表达载体导入驹形杆菌的方法是。

(4) 光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为。

(5) 根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是。

综合题困难

3. 灵敏的嗅觉对多数哺乳动物的生存非常重要，能识别多种气味分子的嗅觉神经元位于哺乳动物的鼻腔上皮。科学家以大鼠为材料，对气味分子的识别机制进行了研究。

(1) 嗅觉神经元的树突末梢作为感受器，在气味分子的刺激下产生，经嗅觉神经元轴突末端与下一个神经元形成的将信息传递到嗅觉中枢，产生嗅觉。

(2) 初步研究表明，气味受体基因属于一个大的基因家族。大鼠中该家族的各个基因含有一些共同序列（保守序列），也含有一些有差异的序列（非保守序列）。不同气味受体能特异识别相应气味分子的关键在于序列所编码的蛋白区段。

(3) 为了分离鉴定嗅觉神经元中的气味受体基因，科学家依据上述保守序列设计了若干对引物（图甲），利用PCR技术从大鼠鼻腔上皮组织mRNA的逆转录产物中分别扩增基因片段，再用限制酶HinfⅠ对扩增产物进行充分酶切。图乙显示用某对引物扩增得到的PCR产物（A）及其酶切片段（B）的电泳结果。结果表明酶切片段长度之和大于PCR产物长度，推断PCR产物由组成。

(4) 在上述实验基础上，科学家们鉴定出多种气味受体，并解析了嗅觉神经元细胞膜上信号转导的部分过程（图丙）。

如果钠离子通道由气味分子直接开启，会使嗅觉敏感度大大降低。根据图丙所示机制，解释少量的气味分子即可被动物感知的原因。

综合题普通

1. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

单选题普通

2. 人染色体DNA中存在串联重复序列，对这些序列进行体外扩增、电泳分离后可得到个体的DNA指纹图谱。该技术可用于亲子鉴定和法医学分析。下列叙述错误的是（　　）

A. DNA分子的多样性、特异性及稳定性是DNA鉴定技术的基础 B. 串联重复序列在父母与子女之间的遗传不遵循孟德尔遗传定律 C. 指纹图谱显示的DNA片段属于人体基础代谢功能蛋白的编码序列 D. 串联重复序列突变可能会造成亲子鉴定结论出现错误

多选题普通

3. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易