青蒿素是有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿中青蒿素的产量较低。为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将基因tms和tmr导入黄花蒿的愈伤组织，获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图所示。下列叙述错误的是（）

1. 我国科学家利用了XbaⅠ和SacⅠ两种限制酶，并运用农杆菌转化法，将富含赖氨酸的蛋白质编码基因（含678pp）导入某植物细胞，再经植物组织培养获得转基因植株，使赖氨酸的含量比对照组明显提高，如图所示是相关培育过程（质粒的其他部位和目的基因内部均无XbaⅠ、SacⅠ、HindⅢ的识别位点），下列说法正确的是（）

A. 一个内含目的基因的模板DNA经PCR扩增6次共产生52个等长片段 B. 农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法 C. 植物组织培养过程中，培养基需添加卡那霉素以便筛选转基因植株 D. 使用SacⅠ和HindⅢ切割重组质粒后能得到1500bp左右的片段

多选题普通

2. 基因工程是一种 DNA 操作技术，其表达载体的构建和检测筛选是两个重要步骤。下图1为某种质粒简图，箭头所指分别为限制酶 EcoRI、BamHI的酶切位点。已知目的基因X的两端分别有包括 EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。图2表示运用影印培养法（指在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法）检测表达载体是否导入大肠杆菌。下列有关叙述错误的是（）

A. 同时使用EcoRI和 BamHI 切割质粒，可避免酶切后质粒的自身环化 B. 转化方法是将质粒表达载体溶于缓冲液后与经 Ca⁺处理的大肠杆菌混合 C. 培养基 A 和培养基 B分别含有四环素和青霉素 D. 从筛选结果分析，含目的基因X的菌落是1、2、3、5

多选题普通

1. 转基因生物培育成功的关键是保证目的基因在受体中的正常表达或抑制特定基因的表达。在这个过程中，根据获得的目的基因不同、采取的措施不同等，培育时选择的方法也不相同。回答下列相关问题：

（1）利用乳腺生物反应器获得胰岛素的过程中，为保证通过反转录法获得的胰岛素基因能正常表达，在构建基因表达载体时需将获得的含目的基因的片段连接在之间，然后通过的方法将基因表达载体导入中。

（2）为降低耐除草剂转基因水稻通过花粉传播而引起的环境生物安全问题，一是利用转入的耐除草剂基因的位置进行控制，如；二是将耐除草剂基因拆分为两部分，只有两部分片段同时存在才具有耐除草剂的特性，请提出可行的措施：。

（3）下图中插入颠倒的转录区的目的是，其原理可能是颠倒的转录区与转录区形成的RNA通过原则形成双链而无法使转录区形成的RNA与核糖体结合。

综合题困难

2. 噬菌体展示技术（如下图）可将某些蛋白质呈递至噬菌体表面，便于对目标蛋白进行筛选、鉴定。以下对该技术的分析错误的是（　　）

A. 建立噬菌体展示库需限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B. 可利用抗原抗体杂交技术筛选目标蛋白 C. 用含有碳源、氮源等营养物质的液体培养基扩大培养噬菌体 D. 该技术可用于获得与抗原亲和力更强的抗体及其基因

单选题普通

3. 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是（）

A. 将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B. 将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C. 将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D. 目的基因成功导入的标志是受体细胞能产生出人的生长激素

单选题普通

1. 苹果生长过程中易受真菌感染，科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中，该基因控制合成的β-1，3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时，应选择下图中的引物（填序号），引物的作用是。

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒，用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后，二者可连接在一起构成重组质粒，原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列，PCR时可在引物（填序号）的（填“3”或“5”）端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列，其参与构成的复合启动子的作用是：①，②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因，只能在导入真核细胞后正确表达，而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中，GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca²⁺处理后的农杆菌共培养，然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌，再将其与苹果外植体共培养进行转化，通过（写出筛选过程），从而获得成功转化的受体细胞。

综合题普通

2. 为探究藏系绵羊种欧拉羊的一对相对性状长绒和短绒的遗传规律，并揭示其在羊毛发育过程中的分子机制，研究人员进行了如下的实验。

(1) 研究人员在野生型的短绒欧拉羊的10号染色体的~1023kb至~1028kb区间设计连续的重叠引物，提取突变体和野生型的进行PCR扩增，结果如图所示。

据图可知分子量较小的扩增产物与点样处的距离较(填“远”或“近”)，推测10号染色体上第对引物对应的调控序列(简称M)是突变体长绒出现的根本原因。

(2) 为了进一步证实突变体的长绒表型与调控序列M密切相关，研究人员利用表型为长绒的突变体与表型为短线的野生型作为亲本进行杂交，统计F₁随机交配后代F₂的表型及比例为长绒：短绒=9：7，然后研究人员对F₂中长绒个体的细胞进行PCR扩增以检测短绒基因在突变型与野生型中的差别，扩增结果显示F₂中长绒个体中完全没有短绒基因的比例为。

(3) 研究人员从野生型和突变体中克隆出不同长度的DNA调控序列M后，运用基因工程技术分别导入到报告基因载体中，并将含有M序列的报告基因载体转染到细胞中，以检测M调控序列对启动子活性的影响，结果如图所示。

因此图中用报告基因的表达量/内参基因的表达量用来衡量的表达水平。实验结果说明突变体的调控序列M影响下游基因的表达，且其作用的发挥与调控序列M插入的有关。与此同时，研究人员还发现在欧拉羊野生型和突变体中，基因ASIC2的表达也会影响欧拉羊短绒的发育，但是检测发现突变体ASIC2蛋白结构与野生型一致。综合上述研究推测突变体长绒表型出现的原因是。

综合题困难

3. 东方果蝇会在瓜果的内部产卵，引起果实早落，给果农带来极大的经济损失。研究人员尝试利用蓖麻毒素，研发雌性特异性致死基因系统，以减少雌果蝇的数量。

蓖麻毒素是蓖麻种子中的一种毒蛋白，由RTA和RTB两部分功能不同的肽链组成；东方果蝇的dsx基因具有特异性剪切识别序列（图1），雌性个体中该序列能使dsx基因的内含子转录的序列被剪切掉，而雄性个体无此功能，因而雌雄果蝇会产生不同的dsx成熟mRNA。

(1) RTB可与细胞表面的糖蛋白或糖脂结合，毒蛋白以方式进入细胞，随后在（填细胞器）内被部分水解，毒蛋白链间二硫键断裂，释放出RTA。RTA具有rRNA酶的活性，可导致（填细胞器）失活，影响蛋白质合成。

(2) 研究人员将dsx基因的部分序列与RTA基因融合（如图1），获得融合基因1，构建基因表达载体，导入果蝇的，进而得到转基因果蝇。转基因雌蝇中表达的肽链对应的mRNA为（填图2中字母）。

(3) 由于存在性别选择性剪接机制，雌蝇会特异性致死。请分析转基因雄蝇不会致死的原因是。

综合题普通

1. 下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（）

A. 分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列 B. 该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上 C. 若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组 D. 获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异

单选题困难

2. 下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

A. 若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 B. 抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 C. 抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA D. 已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置

单选题困难

3. 甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F₁ ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F₁花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体

单选题普通