下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

1. 绿叶海天牛（简称甲）吸食滨海无隔藻（简称乙）后，身体就逐渐变绿，这些“夺来”的叶绿体能够在甲体内长期稳定存在，有科学家推测其原因是在甲的染色体 DNA 上可能存在乙编码叶绿体部分蛋白的核基因。为证实上述推测，以这种变绿的甲为材料进行实验，方法和结果最能支持上述推测的是（）

A. 提取甲的全部DNA，通过 PCR 技术能克隆出乙的编码叶绿体蛋白的核基因 B. 通过核酸分子杂交技术，在甲体内检测到乙的编码叶绿体蛋白的核基因转录出的 RNA C. 给甲提供 ¹⁴CO₂ ，一段时间后检测到其体内的部分有机物出现放射性 D. 用乙编码叶绿体蛋白的核基因做探针与甲的染色体DNA 杂交，结果显示出杂交带

单选题容易

2. 从目前来看，下列哪一生物科技成果运用到了基因工程技术（）

A. 利用酵母菌生产人的胰岛素 B. 单克隆抗体技术 C. 设计试管婴儿技术 D. 微型繁殖和作物脱毒

单选题容易

3. 下列关于限制酶和DNA连接酶的理解正确的是( )

A. 其化学本质都是蛋白质 B. DNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键 C. 它们不能被反复使用 D. 在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶

单选题容易

1. γ﹣氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L﹣谷氨酸脱羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脱羧是高效生产γ﹣氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L﹣谷氨酸脱羧酶基因（gadB）导入生产菌株E.coliA（）

A. 上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B. E.coliB发酵生产γ﹣氨基丁酸时，L﹣谷氨酸钠的作用是供能 C. E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D. 可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒

单选题普通

2. 我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建基因表达载体（如下图），通过农杆菌转化法导入白玫瑰细胞中，获得蓝玫瑰。下列叙述错误的是（）

A. 表达载体中sfp和idgS具有各自的启动子，表达相互独立 B. 可以从链霉菌的基因文库中获取sfp和idgS基因 C. 在构建表达载体时所需的限制酶是PmeⅠ、BamHⅠ、SpeⅠ、SacⅠ D. 若受体白玫瑰细胞不变蓝，则可说明sfp和idgS未导入或导入后未成功表达

单选题普通

3. 斑点印迹杂交是一种简单的DNA分子杂交技术，其技术流程如图。据此分析，下列说法正确的是（）

A. 放射性自显影技术可显示原培养皿中含目的基因的菌落位置 B. p和q片段能够杂交的主要原因是两单链的碱基排列顺序相同 C. p和q片段的杂交双链区域形成过程中有氢键和磷酸二酯键生成 D. 斑点印迹杂交技术可用于检测目的基因是否在受体细胞中成功表达

单选题普通

1. 人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。RT－PCR过程需先进行逆转录合成DNA，然后再进行PCR。图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳铁蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为。在RT－PCR过程中，加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB质粒中。

（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是。

（3）过程③中利用磷脂分子构成脂质体介导的原理是。我们还学过利用法将基因表达载体导入动物受体细胞。

（4）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中，以筛选出转染成功的细胞。

（5）科研过程中，也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子，用目的基因的引物扩增。扩增完毕后，检测发现扩增产物中除目的基因外，还有其他不同大小片段的非目的基因片段，可能的原因一般有。

①模板受到污染 ②退火温度过高 ③引物太短 ④延伸温度偏低

综合题普通

2. 下图1表示大肠杆菌pBR322质粒，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是（）

A. 图1质粒中含有多个限制酶的酶切位点，不含游离的磷酸基团 B. 构建重组质粒时若选用 BamHⅠ会破坏两个标记基因，不便于后续的筛选 C. 构建重组质粒时同时用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ，利于防止目的基因反向连接 D. 将重组质粒直接转入处于感受态的酵母菌细胞，可实现其快速扩增

多选题普通

3. 菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长。某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述正确的是（）

A. 受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞 B. 将目的基因GNA插入到Ti质粒的T-DNA上构建表达载体 C. 菊花外植体产生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞 D. 应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度

多选题普通

1. 温度是影响微生物生长的重要因素，科研人员应用基因工程以实现通过温度控制工程菌合成所需物质。

(1) 大肠杆菌是一种常见的微生物，常被改造为基因工程菌，其原因包括（写出2点）。

(2) 为实现温度控制蛋白质合成，科研人员设计了方案1，构建表达载体（见图1），将其导入大肠杆菌，获得转基因工程菌。大肠杆菌在30℃和37℃均可生长和繁殖，当培养温度为30℃时，C基因编码的C蛋白形成二聚体，，因而大肠杆菌表达荧光蛋白。

(3) 为更精准调控荧光蛋白表达，将上述表达载体改造为方案 2中的载体（见图2）。与方案1相比，方案2的主要优势是。

(4) 为检测方案2，科研人员将该方案中的工程菌稀释涂布在固体培养基上，形成单菌落，培养温度周期控制见图3.依据方案2，每个菌落生长2天后可出现4个不同的荧光环带，请预测图4所示菌落每个环带的工程菌中荧光蛋白表达情况，在下面表格中按时间顺序，依次写出所表达荧光蛋白的颜色。

菌落环带	1	2	3	4
所表达荧光蛋白的颜色		绿、红、绿

(5) 聚羟基脂肪酸酯（PHA）常用于制备可降解的塑料包装材料。PHA是一种生物大分子，可由单体分子3HB 和4HB 随机聚合，或通过分段聚合形成嵌段共聚物（见图5），其中嵌段共聚物性能更优。共聚物的合成过程如图5.请完善以下表格，通过改造方案 2 以实现应用工程菌大规模生产优质 PHA（不考虑各种酶在不同温度下的活性差异）。

操作	目的
对方案 2表达载体的改造为：。将构建好的表达载体导入大肠杆菌，获得工程菌。	获得可以合成PHA的工程菌。
以葡萄糖为原料配置培养基，灭菌后加入上述工程菌。	配制培养基、接种。
控制发酵条件：。	发酵48 小时，获得3HB 比例为25%的嵌段共聚物。

综合题困难

2. 如图为基因工程中所使用的某载体示意图、部分限制酶的识别序列及切割位点。回答下列问题：

(1) 基因工程的核心操作是构建基因表达载体，基因表达载体必须具有启动子、终止子、目的基因、等，其中目的基因应位于之间；在构建基因表达载体时，应选择图中两种限制酶切割载体，并用（填“E.coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）连接载体和目的基因。

(2) 利用基因工程技术构建哺乳动物乳腺生物反应器批量生产药物时，应将药用蛋白基因与动物等调控元件重组在一起，通过方法导入哺乳动物的中，培养成转基因动物后，在其泌乳期从乳汁中收集药物。

(3) 基因工程常利用PCR获取和扩增目的基因，引物设计是PCR成功的关键。引物的作用是，其长度通常为20~30个核苷酸，引物序列过长会导致复性温度过高，不利于酶的作用；扩增循环n次共消耗引物种。

综合题困难

3. 大豆是重要的粮油作物，提高大豆产量是我国农业领域的重要任务。我国研究人员发现，基因S在大豆品种DN（种子较大）中的表达量高于品种TL（种子较小），然后克隆了该基因（两品种中基因S序列无差异）及其上游的启动子序列，并开展相关研究。

(1) 基因S启动子的基本组成单位是。

(2) 通过基因工程方法，将DN克隆的“启动子D+基因S”序列导入无基因S的优质大豆品种YZ。根据图所示信息（不考虑未标明序列）判断构建重组表达载体时，为保证目标序列的完整性，不宜使用的限制酶是；此外，不宜同时选用酶SpeⅠ和XbaⅠ。原因是。

(3) 为验证“启动子D+基因S”是否连接在表达载体上，可用限制酶对重组表达载体酶切后进行电泳。电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应有。经验证的重组表达载体需转入农杆菌，检测转入是否成功的技术是。

(4) 用检测后的农杆菌转化品种YZ所得再生植株YZ-1的种子变大。同时将从TL克隆的“启动子T+基因S”序列成功导入YZ，所得再生植株YZ-2的种子也变大，但小于YZ-1。综合分析，大豆品种DN较TL种子大的原因是。

综合题困难