下图1表示大肠杆菌pBR322质粒，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是（）

1. 下图1表示大肠杆菌pBR322质粒，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是（）

A. 图1质粒中含有多个限制酶的酶切位点，不含游离的磷酸基团 B. 构建重组质粒时若选用 BamHⅠ会破坏两个标记基因，不便于后续的筛选 C. 构建重组质粒时同时用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ，利于防止目的基因反向连接 D. 将重组质粒直接转入处于感受态的酵母菌细胞，可实现其快速扩增

【考点】

基因工程的操作程序（详细）;

【答案】

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多选题普通

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1. 菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长。某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述正确的是（）

A. 受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞 B. 将目的基因GNA插入到Ti质粒的T-DNA上构建表达载体 C. 菊花外植体产生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞 D. 应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度

多选题普通

CRISPR/Cas9基因编辑技术是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行准确切割的技术，通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进步切割（如图）．下列相关叙述错误的是（）

A. Cas9蛋白在核糖体中合成需要消耗能量 B. 向导RNA中的双链区遵循碱基配对方式为A﹣U，C﹣G C. 向导RNA可在逆转录酶催化下合成 D. 若α链剪切点附近序列为…TCCAGAATC…则相应的识别序列为…AGGUCUUAG…

多选题普通

1. γ﹣氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L﹣谷氨酸脱羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脱羧是高效生产γ﹣氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L﹣谷氨酸脱羧酶基因（gadB）导入生产菌株E.coliA（）

A. 上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B. E.coliB发酵生产γ﹣氨基丁酸时，L﹣谷氨酸钠的作用是供能 C. E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D. 可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒

单选题普通

2. 大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具，人生长激素的基因工程过程如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 经①获得该mRNA的最佳材料是受精卵 B. 通过①②过程，可以构建基因组文库 C. 要检测③⑥过程的产物可分别用PCR技术和抗原—抗体杂交技术 D. ⑤过程要在低温和较高浓度的氯化钙溶液中处理使重组DNA易进入受体细胞

单选题普通

3. 为利用链霉菌生产药物A，研究者构建重组DNA并导入链霉菌。重组DNA含启动子P、药物A基因和Neo基因（卡那霉素抗性基因）。培养和筛选过程如下图所示。

下列叙述不正确的是（）

A. 导入成功的链霉菌细胞内可能发生基因重组 B. 诱变处理使培养液中的链霉菌产生不同突变 C. 卡那霉素抗性强弱可反映药物A基因的表达量 D. 生产药物A最适合选用培养基b上的菌株

单选题普通

1. 苹果生长过程中易受真菌感染，科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中，该基因控制合成的β-1，3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时，应选择下图中的引物（填序号），引物的作用是。

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒，用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后，二者可连接在一起构成重组质粒，原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列，PCR时可在引物（填序号）的（填“3”或“5”）端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列，其参与构成的复合启动子的作用是：①，②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因，只能在导入真核细胞后正确表达，而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中，GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca²⁺处理后的农杆菌共培养，然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌，再将其与苹果外植体共培养进行转化，通过（写出筛选过程），从而获得成功转化的受体细胞。

综合题普通

2. 为探究藏系绵羊种欧拉羊的一对相对性状长绒和短绒的遗传规律，并揭示其在羊毛发育过程中的分子机制，研究人员进行了如下的实验。

(1) 研究人员在野生型的短绒欧拉羊的10号染色体的~1023kb至~1028kb区间设计连续的重叠引物，提取突变体和野生型的进行PCR扩增，结果如图所示。

据图可知分子量较小的扩增产物与点样处的距离较(填“远”或“近”)，推测10号染色体上第对引物对应的调控序列(简称M)是突变体长绒出现的根本原因。

(2) 为了进一步证实突变体的长绒表型与调控序列M密切相关，研究人员利用表型为长绒的突变体与表型为短线的野生型作为亲本进行杂交，统计F₁随机交配后代F₂的表型及比例为长绒：短绒=9：7，然后研究人员对F₂中长绒个体的细胞进行PCR扩增以检测短绒基因在突变型与野生型中的差别，扩增结果显示F₂中长绒个体中完全没有短绒基因的比例为。

(3) 研究人员从野生型和突变体中克隆出不同长度的DNA调控序列M后，运用基因工程技术分别导入到报告基因载体中，并将含有M序列的报告基因载体转染到细胞中，以检测M调控序列对启动子活性的影响，结果如图所示。

因此图中用报告基因的表达量/内参基因的表达量用来衡量的表达水平。实验结果说明突变体的调控序列M影响下游基因的表达，且其作用的发挥与调控序列M插入的有关。与此同时，研究人员还发现在欧拉羊野生型和突变体中，基因ASIC2的表达也会影响欧拉羊短绒的发育，但是检测发现突变体ASIC2蛋白结构与野生型一致。综合上述研究推测突变体长绒表型出现的原因是。

综合题困难

3. 东方果蝇会在瓜果的内部产卵，引起果实早落，给果农带来极大的经济损失。研究人员尝试利用蓖麻毒素，研发雌性特异性致死基因系统，以减少雌果蝇的数量。

蓖麻毒素是蓖麻种子中的一种毒蛋白，由RTA和RTB两部分功能不同的肽链组成；东方果蝇的dsx基因具有特异性剪切识别序列（图1），雌性个体中该序列能使dsx基因的内含子转录的序列被剪切掉，而雄性个体无此功能，因而雌雄果蝇会产生不同的dsx成熟mRNA。

(1) RTB可与细胞表面的糖蛋白或糖脂结合，毒蛋白以方式进入细胞，随后在（填细胞器）内被部分水解，毒蛋白链间二硫键断裂，释放出RTA。RTA具有rRNA酶的活性，可导致（填细胞器）失活，影响蛋白质合成。

(2) 研究人员将dsx基因的部分序列与RTA基因融合（如图1），获得融合基因1，构建基因表达载体，导入果蝇的，进而得到转基因果蝇。转基因雌蝇中表达的肽链对应的mRNA为（填图2中字母）。

(3) 由于存在性别选择性剪接机制，雌蝇会特异性致死。请分析转基因雄蝇不会致死的原因是。

综合题普通

1. 下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（）

A. 分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列 B. 该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上 C. 若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组 D. 获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异

单选题困难

2. 下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

A. 若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 B. 抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 C. 抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA D. 已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置

单选题困难

3. 甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F₁ ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F₁花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体

单选题普通