甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F1 ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

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1. 甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F₁ ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F₁花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体

【考点】

植物组织培养的过程; 基因工程的操作程序（详细）;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

换一批

1. 番茄根尖经过植物组织培养过程可以获得完整的番茄植株，有关此过程的叙述错误的是（）

A. 此过程中发生了细胞的脱分化、再分化 B. 植物激素在此过程中起调节作用 C. 此过程中若发生杂菌污染则难以获得目的植株 D. 根尖细胞最终发育为无叶绿体的植株

单选题容易

2. “不是花中偏爱菊，此花开尽更无花”，菊花因高洁的品质备受人们喜爱。为实现菊花的快速繁殖，研究人员利用其外植体培养出大量幼苗，下列属于该培养过程必需条件的是（）

A. 外植体细胞具有完整的细胞核 B. 外植体需经过彻底灭菌处理 C. 外植体需用酶分散成单个细胞 D. 外植体细胞处于未分化状态

单选题容易

3. 浙江大学园艺系通过研究，找到了一条更适于规模化快速繁殖的途径，将非洲菊试管苗叶柄上部切段插入发芽培养基，不经愈伤组织直接形成丛状苗。上述培养过程不涉及（）

A. 分化 B. 脱分化 C. 细胞分裂 D. 细胞生长

单选题容易

1. γ﹣氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L﹣谷氨酸脱羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脱羧是高效生产γ﹣氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L﹣谷氨酸脱羧酶基因（gadB）导入生产菌株E.coliA（）

A. 上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B. E.coliB发酵生产γ﹣氨基丁酸时，L﹣谷氨酸钠的作用是供能 C. E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D. 可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒

单选题普通

2. 兰州百合栽培过程中易受病毒侵染，造成品质退化。某研究小组尝试通过组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如下图。下列叙述正确的是（）

A. ①为脱分化过程，1号培养基中的愈伤组织是排列规则的薄壁组织团块 B. ②为再分化过程，愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变或基因重组 C. 3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值大于1 D. 百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，可以作为该研究中的外植体

单选题普通

3. 紫草富含一种红色的次生代谢产物——紫草宁，具有抗菌、消炎的功效。科研人员利用紫草新生的营养芽进行培养获得愈伤组织，再使用液体培养基进行细胞悬浮培养，以获得更多的紫草宁。下列叙述正确的是（）

A. 对紫草新生的营养芽进行彻底灭菌后可作为外植体 B. 愈伤组织是由不同结构和功能的一团薄壁细胞组成 C. 为获得愈伤组织，培养时需要加入细胞融合诱导剂 D. 在进行细胞悬浮培养的过程中，需要通入无菌空气

单选题普通

1. 人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。RT－PCR过程需先进行逆转录合成DNA，然后再进行PCR。图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳铁蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为。在RT－PCR过程中，加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB质粒中。

（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是。

（3）过程③中利用磷脂分子构成脂质体介导的原理是。我们还学过利用法将基因表达载体导入动物受体细胞。

（4）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中，以筛选出转染成功的细胞。

（5）科研过程中，也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子，用目的基因的引物扩增。扩增完毕后，检测发现扩增产物中除目的基因外，还有其他不同大小片段的非目的基因片段，可能的原因一般有。

①模板受到污染 ②退火温度过高 ③引物太短 ④延伸温度偏低

综合题普通

2. 下图1表示大肠杆菌pBR322质粒，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是（）

A. 图1质粒中含有多个限制酶的酶切位点，不含游离的磷酸基团 B. 构建重组质粒时若选用 BamHⅠ会破坏两个标记基因，不便于后续的筛选 C. 构建重组质粒时同时用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ，利于防止目的基因反向连接 D. 将重组质粒直接转入处于感受态的酵母菌细胞，可实现其快速扩增

多选题普通

3. 菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长。某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述正确的是（）

A. 受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞 B. 将目的基因GNA插入到Ti质粒的T-DNA上构建表达载体 C. 菊花外植体产生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞 D. 应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度

多选题普通

1. 甘薯是一种重要的粮食作物，对低温敏感，极不耐霜冻。当温度低于10℃时，甘薯的储藏性能降低。科研人员欲将黄粉虫细胞内的抗冻蛋白基因TmAFP导入甘薯细胞中培育抗冻甘薯新品种，主要技术路线如图1所示，相关限制酶切割位点如图2所示（箭头表示切割位点）。

据图回答问题。

(1) 若要利用PCR技术获取并克隆TmAFP基因，需要设计种引物，引物的碱基序列不能互补，以免发生。PCR反应中过程所需温度最低。

(2) 图1中①是指，这一步是培育转基因抗冻甘薯的核心工作。为了成功得到重组质粒P₂ ，确保TmAFP基因插入载体中的方向正确，最好选用限制酶切割质粒P₁。

(3) 采用农杆菌转化法将TmAFP基因导入甘薯细胞，农杆菌细胞中T-DNA的作用是。

(4) 图1中⑤和⑥分别为过程，可用技术检测转基因甘薯愈伤组织中是否产生抗冻蛋白。

综合题普通

2. 红景天中的HMA3基因能编码Cd（镉）转运蛋白，科研人员将红景天中的HMA3基因转入栾树，以实现栾树的定向改良，使其增强对Cd的富集能力，从而更有效治理Cd污染。主要技术流程如下图，请回答：

(1) 重组质粒的构建、扩增、保存。为构建Cd转运蛋白与绿色荧光蛋白（GFP）的融合蛋白，需确保目的基因与质粒正确连接。构建重组质粒时用酶（双酶切）切PCR纯化产物（已添加相应酶切位点）及Ti质粒，然后通过DNA连接酶进行连接制备重组质粒，并依次转入大肠杆菌和农杆菌。

(2) 栾树愈伤组织的诱导。切割无菌苗将其茎段插入愈伤组织培养基，培养基应添加等植物激素，放入培养箱，经过21d的黑暗诱导，茎段经形成愈伤组织。

(3) 农杆菌介导转化体系的建立。用农杆菌单克隆菌株对栾树愈伤组织进行侵染转化，并用添加的培养基（抗生素）筛选出转化成功的愈伤组织，将愈伤组织继续培养成完整植株。

(4) 目的基因的检测和鉴定。取愈伤组织用纤维素酶和果胶酶处理一段时间获得原生质体，在激光共聚焦下观测到细胞膜发出绿色荧光。据此可知，在本研究中选择GFP与Cd转运蛋白构建融合蛋白的目的是。若要从个体生物学水平上进行目的基因的检测与鉴定，则可以检测比较转基因栾树与野生型栾树。

综合题普通

3. 转基因植物的生物安全问题一直是人们争议的焦点，其中标记基因是安全风险来源之一，因此作物转基因后删除标记基因具有重要的意义。有报道发现，雌激素诱导的 Cre/loxP重组系统可以利用在加有雌激素的条件下，Cre 酶定位定向地删除转基因作物中位于 2 个 loxP 位点中的基因序列，且使得2个 loxP 位点重组为1个loxP 位点，如图1所示。某科研小组利用该重组系统获得无标记基因的转耐低磷G基因的大豆，图2中P1~P6代表引物，其中引物P1与相应启动子互补，P2 与 XVE基因序列互补，P3、P4是根据NPTⅡ基因(标记基因)序列设计的特异性引物，P5、P6是根据目的基因G序列设计的特异性引物。整个实验大体流程如下，请回答相关问题：

(1) 构建含G基因的重组 Ti质粒：为了获取耐低磷G基因，该科研小组设计引物进行PCR扩增，产物经电泳染色后发现不止一个条带，从PCR 循环过程分析可能的原因是。经过后期的改进，获得了大量的G基因。接着利用酶将经酶切后的G基因及质粒成功构建出重组 Ti质粒，如图2。

(2) 将重组 Ti质粒导入农杆菌并筛选：先利用的低温、低浓度氯化钙溶液制备感受态农杆菌，然后将重组 Ti质粒转入到感受态农杆菌。为了提高该转化效率，需要考虑的因素有 (A.温度 B.时间 C.重组质粒的浓度 )D.农杆菌的种类和状态)。判断导入是否成功，可先向农杆菌菌液中加入新鲜的液体培养基，并置于摇床上慢速培养一段时间，接着利用法将菌悬液接种至选择培养基上进行培养，最后挑取单菌落进行后续的鉴定。

(3) 转化大豆子叶并筛选：将成功转化的农杆菌与无菌大豆子叶进行共培养，适宜时间后将大豆子叶转移至添加有的培养基中进行筛选，获得成功转化的大豆子叶。再经形成愈伤组织，愈伤组织经过器官发生途径或途径进一步分化形成大豆苗。

(5) 转基因大豆苗的鉴定：为了直接判断转基因大豆是否成功，请写出简要的实验思路。

实验探究题困难