我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建基因表达载体（如下图），通过农杆菌转化法导入白玫瑰细胞中，获得蓝玫瑰。下列叙述错误的是（）

1. 绿叶海天牛（简称甲）吸食滨海无隔藻（简称乙）后，身体就逐渐变绿，这些“夺来”的叶绿体能够在甲体内长期稳定存在，有科学家推测其原因是在甲的染色体 DNA 上可能存在乙编码叶绿体部分蛋白的核基因。为证实上述推测，以这种变绿的甲为材料进行实验，方法和结果最能支持上述推测的是（）

A. 提取甲的全部DNA，通过 PCR 技术能克隆出乙的编码叶绿体蛋白的核基因 B. 通过核酸分子杂交技术，在甲体内检测到乙的编码叶绿体蛋白的核基因转录出的 RNA C. 给甲提供 ¹⁴CO₂ ，一段时间后检测到其体内的部分有机物出现放射性 D. 用乙编码叶绿体蛋白的核基因做探针与甲的染色体DNA 杂交，结果显示出杂交带

单选题容易

2. 从目前来看，下列哪一生物科技成果运用到了基因工程技术（）

A. 利用酵母菌生产人的胰岛素 B. 单克隆抗体技术 C. 设计试管婴儿技术 D. 微型繁殖和作物脱毒

单选题容易

3. 下列关于限制酶和DNA连接酶的理解正确的是( )

A. 其化学本质都是蛋白质 B. DNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键 C. 它们不能被反复使用 D. 在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶

单选题容易

1. γ﹣氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L﹣谷氨酸脱羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脱羧是高效生产γ﹣氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L﹣谷氨酸脱羧酶基因（gadB）导入生产菌株E.coliA（）

A. 上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB B. E.coliB发酵生产γ﹣氨基丁酸时，L﹣谷氨酸钠的作用是供能 C. E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D. 可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒

单选题普通

2. 斑点印迹杂交是一种简单的DNA分子杂交技术，其技术流程如图。据此分析，下列说法正确的是（）

A. 放射性自显影技术可显示原培养皿中含目的基因的菌落位置 B. p和q片段能够杂交的主要原因是两单链的碱基排列顺序相同 C. p和q片段的杂交双链区域形成过程中有氢键和磷酸二酯键生成 D. 斑点印迹杂交技术可用于检测目的基因是否在受体细胞中成功表达

单选题普通

3. 大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具，人生长激素的基因工程过程如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 经①获得该mRNA的最佳材料是受精卵 B. 通过①②过程，可以构建基因组文库 C. 要检测③⑥过程的产物可分别用PCR技术和抗原—抗体杂交技术 D. ⑤过程要在低温和较高浓度的氯化钙溶液中处理使重组DNA易进入受体细胞

单选题普通

1. 人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。RT－PCR过程需先进行逆转录合成DNA，然后再进行PCR。图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳铁蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为。在RT－PCR过程中，加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB质粒中。

（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是。

（3）过程③中利用磷脂分子构成脂质体介导的原理是。我们还学过利用法将基因表达载体导入动物受体细胞。

（4）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中，以筛选出转染成功的细胞。

（5）科研过程中，也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子，用目的基因的引物扩增。扩增完毕后，检测发现扩增产物中除目的基因外，还有其他不同大小片段的非目的基因片段，可能的原因一般有。

①模板受到污染 ②退火温度过高 ③引物太短 ④延伸温度偏低

综合题普通

2. 下图1表示大肠杆菌pBR322质粒，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是（）

A. 图1质粒中含有多个限制酶的酶切位点，不含游离的磷酸基团 B. 构建重组质粒时若选用 BamHⅠ会破坏两个标记基因，不便于后续的筛选 C. 构建重组质粒时同时用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ，利于防止目的基因反向连接 D. 将重组质粒直接转入处于感受态的酵母菌细胞，可实现其快速扩增

多选题普通

3. 菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长。某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述正确的是（）

A. 受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞 B. 将目的基因GNA插入到Ti质粒的T-DNA上构建表达载体 C. 菊花外植体产生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞 D. 应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度

多选题普通

1. 半乳糖醇可作为新型甜味剂应用于糖果、面包等食品工业。酿酒酵母长期用于食品加工业，具有很强的食品安全性与大规模发酵能力。为构建酿酒酵母工程菌株生产半乳糖醇，回答下列问题：

(1) 为将木糖还原酶基因（如图甲）准确连接至pRS313质粒（如图乙）内，需在引物1、2的5’端分别引入限制酶B、A的识别位点，经PCR扩增得到木糖还原酶基因。对目的基因和pRS313质粒进行限制酶B、A双酶切处理，目的是。经酶切后的目的基因和质粒经DNA连接酶连接得到。

（注：氨苄青霉素作用于细菌的细胞壁，抑制细菌细胞壁的合成）

(2) 将重组质粒导入（填“酿酒酵母”或“大肠杆菌”）中，采用法将菌液接种至含有氨苄青霉素的LB平板进行筛选。挑取单菌落进行DNA测序，测序验证正确后，利用质粒提取试剂盒提取重组质粒。

(3) 将重组质粒导入酿酒酵母时，需利用醋酸锂-Tris-EDTA．缓冲液-PEG共同处理酿酒酵母，其中EDTA的作用是抑制DNA酶的活性，防止。

(4) 取各重组菌株制成等浓度的菌液，等量接种到含等量D-半乳糖的培养基中，发酵12h后立即离心并分离沉淀和上清液以终止发酵。测定上清液中半乳糖醇的含量，比较各重组菌株单位时间内半乳糖醇的产量，结果表明导入黑曲霉木糖还原酶基因anxr的pRS313-anxr工程菌株是优势菌株。这属于对（填“基因”、“基因表达产物”或“个体性状”）的检测，检测时需以菌株作为阴性对照。

(5) pRS313-anxr工程菌株中D-半乳糖的代谢途径如图丙，为进一步提高D-半乳糖转化为半乳糖醇的效率；研究者对工程菌中的半乳糖激酶基因进行，通过DNA测序筛选成功改造的菌株。据图分析，除木糖还原酶和半乳糖激酶外，限制半乳糖醇产量的因素还有（写出2点即可）。

综合题普通

2. 研究表明羊乳中的β-乳球蛋白（BLG）是人体主要过敏源，图为研究人员利用基因编辑技术敲除山羊中BLG基因同时敲入人乳铁蛋白（hLF）基因并获得转基因山羊的操作过程。图中sgBLG/Cas9复合物中，sgBLG为能准确识别图中山羊DNA特定序列的RNA，并引导Cas9蛋白对DNA进行切割。检测发现过程②中，hLF基因成功插入在母羊乙成纤维细胞中的一条常染色体上。

(1) Cas9蛋白类似于基因工程中常用到的酶，但Cas9蛋白与该酶的主要区别是。

(2) 图中复合物1所识别的DNA序列为5'-TATACTGGC-3'，则sgBLG的序列为5^'--3^'。

(3) 下列技术中，过程①②可能运用的技术有，过程③④⑤中，运用到的技术有。（编号选填）

a.显微注射技术 b.动物细胞培养技术 c.胚胎移植技术 d.DNA重组技术 e.动物细胞融合技术 f.细胞核移植技术

(4) 科研团队想进一步获得纯合能稳定遗传“人乳铁蛋白基因”的转基因山羊，其技术路线的设计思路是。

综合题普通

3. 人乳铁蛋白（hLTF）是一种铁结合的糖蛋白，具有抑菌、提高免疫力等重要功能。研究者通过转基因技术培育能生产hLTF的奶牛，从牛奶中分离提纯hLTF。回答下列问题。

(1) 从原核生物中获取的质粒不适用于直接构建真核生物的表达载体，其启动子需要进行替换才有可能在真核细胞中表达，主要原因是。

(2) 研究人员采用小鼠乳清酸蛋白基因的启动子和终止子来替换pA质粒中的部分序列，再拼接hLTF基因，最终形成pW2-hLTF重组质粒，过程如下图：

通过PCR扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子、终止子和hLTF基因时，均需引入限制酶的识别序列和切割位点，以便剪接到质粒的指定位置。据图分析，PCR扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子所需的两种引物应分别包含、（限制酶）的识别序列。将修饰后的hLTF基因插入到重组质粒的启动子和终止子之间后，不一定能获得所需要的基因表达载体，原因是。

(3) 经检测筛选所获得的基因表达载体pW2-hLTF通过的方法导入到奶牛的受精卵细胞中，以获得能产生hLTF的转基因奶牛。

实验探究题普通

1. 下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

A. 若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 B. 抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 C. 抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA D. 已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置

单选题困难