1.
人乳铁蛋白（hLTF）是一种铁结合的糖蛋白，具有抑菌、提高免疫力等重要功能。研究者通过转基因技术培育能生产hLTF的奶牛，从牛奶中分离提纯hLTF。回答下列问题。
(1)
从原核生物中获取的质粒不适用于直接构建真核生物的表达载体，其启动子需要进行替换才有可能在真核细胞中表达，主要原因是。
(2)
研究人员采用小鼠乳清酸蛋白基因的启动子和终止子来替换pA质粒中的部分序列，再拼接hLTF基因，最终形成pW2-hLTF重组质粒，过程如下图：
(3)
经检测筛选所获得的基因表达载体pW2-hLTF通过的方法导入到奶牛的受精卵细胞中，以获得能产生hLTF的转基因奶牛。
通过PCR扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子、终止子和hLTF基因时，均需引入限制酶的识别序列和切割位点，以便剪接到质粒的指定位置。据图分析，PCR扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子所需的两种引物应分别包含、（限制酶）的识别序列。将修饰后的hLTF基因插入到重组质粒的启动子和终止子之间后，不一定能获得所需要的基因表达载体，原因是。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用;
基因工程的应用;
基因工程的基本工具（详细）;
基因工程的操作程序（详细）;
能力提升
