PCR中使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3'端加上多聚A。PCR扩增过程中，由于不清楚目的基因的完整DNA序列，获得的目的片段通常需要重组到T-载体中，通过测序了解DNA序列。LacZ基因在IPTG诱导下的表达产物能够水解X-gal使菌落呈蓝色，否则呈白色。目的基因插入到LacZ中会导致该基因失活，因此可采用蓝白斑法筛选含有重组质粒的大肠杆菌。下图为T载体的结构示意图（Amp'为氨苄青霉素抗性基因）。下列说法正确的是（　　）

1. 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列叙述正确的是（　　）

A. 用显微注射技术将含EPO基因的表达载体导入羊的乳腺细胞中，可得到乳腺生物反应器 B. 构建基因表达载体时，需将EPO基因与乳腺蛋白基因的启动子重组在一起 C. 该转基因羊中的EPO基因可在羊的乳腺细胞中表达 D. 可通过PCR技术检测EPO基因是否插入山羊基因组

多选题容易

2. 某研究人员欲利用核移植技术来治疗糖尿病，提出了如图所示的方案。下列相关叙述正确的是（）

A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植 B. 图中用到了体细胞核移植技术、DNA重组技术等 C. 图中所用的去核卵母细胞一般处于减数分裂Ⅱ中期 D. 图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生基因突变

单选题容易

3. 下图表示培育转基因抗病毒农作物的过程示意图。下列叙述正确的是（）

A. 过程a需要限制酶和DNA连接酶的参与 B. 过程b需要用CaCl₂处理，以提高农作物细胞壁的通透性 C. 抗病毒基因一旦整合到农作物细胞的染色体上，就能正常表达 D. 转基因抗病毒农作物是否培育成功可通过接种特定病毒进行鉴定

多选题容易

1. 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法不正确的是（　　）

A. 工程菌产生的生长激素可以直接使用效果良好 B. 将重组质粒导入细菌B常用的方法是用Ca²⁺处理细菌 C. 目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有四环素的培养基上生长 D. 将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的是只导入了质粒A的细菌

多选题普通

2. OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四个基因分别编码四种不同的酶，研究人员将这些基因分别与叶绿体转运肽（能引导合成的蛋白质进入叶绿体）基因连接，构建多基因表达载体（载体中部分序列如图所示），利用农杆菌转化法将其导入棉花细胞，在棉花叶绿体内构建了一条新的代谢途径，提高了棉花的产量。下列相关叙述错误的有（）

A. 使用Ca²⁺处理农杆菌，有利于多基因表达载体的导入 B. 应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌转化的棉花细胞 C. OsGLO1、EcCAT基因转录时以DNA的同一条单链为模板 D. 四个基因都在棉花叶绿体内进行转录、翻译

多选题普通

3. 转运肽能够引导在细胞质中合成的蛋白质进入叶绿体，组装成叶绿体的完整结构，从而使植物能够顺利地进行光合作用。研究人员尝试将抗除草剂基因（抗草丁膦基因）和转运肽基因（如图1）同时导入大豆细胞并获得高产量的抗除草剂转基因大豆作物（如图2）。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。下列叙述错误的是（）

A. 用ClaI和SacI酶对转运肽基因酶切后能插入到T-DNA区内 B. T-DNA携带目的基因进入大豆细胞并整合到其染色体DNA上 C. 导入重组Tì质粒的农杆菌不能在含卡那霉素的培养基中正常生长 D. 喷施一定浓度的草丁膦可检测转基因大豆是否获得抗除草剂抗性

多选题困难

1. 科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L-PG），可获得乳酸乙酯（白酒香味的主要来源）高产菌株，过程如图。下列分析不合理的是（）

A. 转入的L-PG基因表达产物不能影响酿酒酵母的活性 B. L-PG基因替换质粒上的PD基因需要两端携带相同基因片段 C. 标记基因Amp^r可检测是否成功构建乳酸乙酯高产菌株 D. 可以利用PCR技术筛选含有L-PG基因的受体细胞

单选题普通

2. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是（）

A. ②的构建需要限制性内切核酸酶和DNA聚合酶参与 B. ③导入④后，重组Ti质粒整合到④的染色体DNA上 C. ②到③过程，需要钙离子处理，有助于促进重组Ti质粒转化到农杆菌细胞中 D. ⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了不可遗传变异

单选题普通

3. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，所用的Ti质粒如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 该技术的原理是基因突变 B. 构建基因表达载体需要限制酶和耐高温的DNA聚合酶 C. 可利用抗原-抗体杂交技术检测受体细胞中的抗病毒蛋白 D. 可利用卡那霉素抗性基因检测是否成功构建抗病毒番木瓜

单选题普通

1. 为探究藏系绵羊种欧拉羊的一对相对性状长绒和短绒的遗传规律，并揭示其在羊毛发育过程中的分子机制，研究人员进行了如下的实验。

(1) 研究人员在野生型的短绒欧拉羊的10号染色体的~1023kb至~1028kb区间设计连续的重叠引物，提取突变体和野生型的进行PCR扩增，结果如图所示。

据图可知分子量较小的扩增产物与点样处的距离较(填“远”或“近”)，推测10号染色体上第对引物对应的调控序列(简称M)是突变体长绒出现的根本原因。

(2) 为了进一步证实突变体的长绒表型与调控序列M密切相关，研究人员利用表型为长绒的突变体与表型为短线的野生型作为亲本进行杂交，统计F₁随机交配后代F₂的表型及比例为长绒：短绒=9：7，然后研究人员对F₂中长绒个体的细胞进行PCR扩增以检测短绒基因在突变型与野生型中的差别，扩增结果显示F₂中长绒个体中完全没有短绒基因的比例为。

(3) 研究人员从野生型和突变体中克隆出不同长度的DNA调控序列M后，运用基因工程技术分别导入到报告基因载体中，并将含有M序列的报告基因载体转染到细胞中，以检测M调控序列对启动子活性的影响，结果如图所示。

因此图中用报告基因的表达量/内参基因的表达量用来衡量的表达水平。实验结果说明突变体的调控序列M影响下游基因的表达，且其作用的发挥与调控序列M插入的有关。与此同时，研究人员还发现在欧拉羊野生型和突变体中，基因ASIC2的表达也会影响欧拉羊短绒的发育，但是检测发现突变体ASIC2蛋白结构与野生型一致。综合上述研究推测突变体长绒表型出现的原因是。

综合题困难

2. 为验证pdx1蛋白是决定胰岛形成的最为关键的蛋白质。科研人员以斑马鱼为模式生物，先获得在胰岛区域特异性表达GFP（绿色荧光蛋白，可在荧光显微镜下观察到绿色荧光）的转基因斑马鱼（G品系斑马鱼）。特异性敲除G品系斑马鱼的pdx1基因，获得N品系斑马鱼。回答下列问题：

(1) 制备G品系斑马鱼。

①获得GFP基因。方法一：可从库中获得GFP基因的序列信息，再通过人工合成的方法获得。方法二：以含GFP基因的质粒作为进行PCR，扩增得到大量GFP基因。

②制备重组质粒。将基因的启动子和GFP基因相连后，再与质粒相连。

③导入受体细胞。将重组质粒导入斑马鱼的受精卵，选择受精卵为受体细胞的原因是。

④筛选G品系斑马鱼。若在荧光显微镜下观察小鱼的各个器官时发现，表明成功得到G品系斑马鱼。

⑤筛选纯合G品系斑马鱼。鉴定GFP插入的位置，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对GFP基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图1所示。将G品系斑马鱼相互交配，提取不同子代个体的DNA用引物1、2进行PCR并电泳，结果如图2所示。加样孔对应的个体是纯合G品系斑马鱼。若改用引物3、4进行PCR并电泳，加样孔对应的个体是纯合野生型斑马鱼。

(2) 制备N品系斑马鱼。CRISPR-Cas9技术能特异性敲除基因。制备针对pdx1基因的CRISPR-Cas9体系，采用的方法导入G品系斑马鱼的受精卵中。筛选获得了1个pdx1突变品系（N），PCR后进行，得到的序列如下图3所示（图中下划线表示替换，“-”表示缺失1个碱基）。预计突变品系N的pdx1蛋白含个氨基酸。（已知密码子：CCU-脯氨酸；UAA、UGA和UAG为终止密码子）