转运肽能够引导在细胞质中合成的蛋白质进入叶绿体，组装成叶绿体的完整结构，从而使植物能够顺利地进行光合作用。研究人员尝试将抗除草剂基因（抗草丁膦基因）和转运肽基因（如图1）同时导入大豆细胞并获得高产量的抗除草剂转基因大豆作物（如图2）。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。下列叙述错误的是（）

1. 科研人员利用图中质粒调控小鼠细胞中M基因的表达，已知dCas9蛋白能在向导RNA（gRNA，引导RNA编辑的一种小型RNA分子）的作用下结合基因组DNA的特定位点，抑制其基因表达。下列叙述错误的是（）

A. 使用EcoRⅠ对M基因和质粒进行切割，加入DNA连接酶后得到的都是重组质粒 B. dCas9蛋白在向导RNA的引导下与基因组DNA分子通过碱基互补配对而结合 C. 在含潮霉素的培养基上存活的细胞是含有重组质粒、M基因表达量降低的受体细胞 D. 可用含重组质粒的细胞为实验组、M基因正常表达的细胞为对照组探究M基因的功能

多选题容易

2. 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列叙述正确的是（　　）

A. 用显微注射技术将含EPO基因的表达载体导入羊的乳腺细胞中，可得到乳腺生物反应器 B. 构建基因表达载体时，需将EPO基因与乳腺蛋白基因的启动子重组在一起 C. 该转基因羊中的EPO基因可在羊的乳腺细胞中表达 D. 可通过PCR技术检测EPO基因是否插入山羊基因组

多选题容易

3. 某研究人员欲利用核移植技术来治疗糖尿病，提出了如图所示的方案。下列相关叙述正确的是（）

A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植 B. 图中用到了体细胞核移植技术、DNA重组技术等 C. 图中所用的去核卵母细胞一般处于减数分裂Ⅱ中期 D. 图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生基因突变

单选题容易

1. 科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L-PG），可获得乳酸乙酯（白酒香味的主要来源）高产菌株，过程如图。下列分析合理的是（）

A. 转入的L-PG基因表达产物将影响酿酒酵母的活性 B. L-PG基因替换质粒上的PD基因是通过同源重组实现的 C. 标记基因Amp^r可检测是否成功构建乳酸乙酯高产菌株 D. 可以利用PCR技术筛选含有L-PG基因的受体细胞

多选题普通

2. 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法不正确的是（　　）

A. 工程菌产生的生长激素可以直接使用效果良好 B. 将重组质粒导入细菌B常用的方法是用Ca²⁺处理细菌 C. 目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有四环素的培养基上生长 D. 将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的是只导入了质粒A的细菌

多选题普通

3. OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四个基因分别编码四种不同的酶，研究人员将这些基因分别与叶绿体转运肽（能引导合成的蛋白质进入叶绿体）基因连接，构建多基因表达载体（载体中部分序列如图所示），利用农杆菌转化法将其导入棉花细胞，在棉花叶绿体内构建了一条新的代谢途径，提高了棉花的产量。下列相关叙述错误的有（）

A. 使用Ca²⁺处理农杆菌，有利于多基因表达载体的导入 B. 应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌转化的棉花细胞 C. OsGLO1、EcCAT基因转录时以DNA的同一条单链为模板 D. 四个基因都在棉花叶绿体内进行转录、翻译

多选题普通

1. 科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因（PD）替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因（L-PG），可获得乳酸乙酯（白酒香味的主要来源）高产菌株，过程如图。下列分析不合理的是（）

A. 转入的L-PG基因表达产物不能影响酿酒酵母的活性 B. L-PG基因替换质粒上的PD基因需要两端携带相同基因片段 C. 标记基因Amp^r可检测是否成功构建乳酸乙酯高产菌株 D. 可以利用PCR技术筛选含有L-PG基因的受体细胞

单选题普通

2. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是（）

A. ②的构建需要限制性内切核酸酶和DNA聚合酶参与 B. ③导入④后，重组Ti质粒整合到④的染色体DNA上 C. ②到③过程，需要钙离子处理，有助于促进重组Ti质粒转化到农杆菌细胞中 D. ⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了不可遗传变异

单选题普通

3. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，所用的Ti质粒如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 该技术的原理是基因突变 B. 构建基因表达载体需要限制酶和耐高温的DNA聚合酶 C. 可利用抗原-抗体杂交技术检测受体细胞中的抗病毒蛋白 D. 可利用卡那霉素抗性基因检测是否成功构建抗病毒番木瓜

单选题普通

1. 炎症性肠病（IBD）是一种易导致结肠癌的慢性疾病，患者肠道内会产生硫代硫酸盐，且生成量与疾病严重程度正相关。为简化疾病诊断和精确用药，科研人员开发了智能工程菌。

(1) 科研人员将抗炎蛋白基因与硫代硫酸盐特异性诱导激活的启动子P连接，构建出图1所示表达载体。先用处理大肠杆菌细胞，使细胞处于感受态，再将表达载体导入其中，筛选得到菌株E。最常用的表达载体是。饲喂菌株E的IBD小鼠症状明显缓解。选用启动子P的优点是仅在IBD发生时才表达抗炎蛋白且，能精准治疗IBD。

(2) 科研人员拟向菌株E中导入新元件，得到菌株Ec，以通过观察饲喂菌株Ec的小鼠粪便中的荧光情况来诊断IBD严重程度。制备新元件有图2所示两种方案。

①与方案1相比，方案2的主要优势是排除不同的小鼠粪便样品中对诊断结果的影响。

②利用方案2所获得的Ec菌饲喂IBD小鼠后，若粪便样品中仅发红色荧光的菌为x个，同时发红色和绿色荧光的菌为y个，则反映IBD发病程度的数学表达式为。

(3) 硫代硫酸盐易被分解，因此Ec菌荧光情况的观察只能反映观察时刻的情况。为了让曾经患过IBD的情况被记录下来，科研人员继续向菌株Ec中导入含图3所示元件的表达载体，得到智能工程菌R。正常的LacZ基因编码的蛋白可使大肠杆菌菌落在含X-gal（无色）的培养基上呈现蓝色。突变基因A-LacZ无法表达LacZ酶，B-sgRNA能使突变基因A-LacZ恢复正常序列。

给小鼠饲喂智能工程菌R后，收集小鼠粪便中的工程菌R，将工程菌R涂布在含的平板上，若，则说明小鼠曾患IBD。

(4) 为将工程菌R用于临床诊断和治疗，请提出下一步应该研究的问题：。

综合题困难

2. TRE元件是一种特定的DNA序列，由多个四环素操纵子（tetO）串联组成。TetR（四环素阻遏蛋白）是大肠杆菌中的一种蛋白质，含有DNA结合域，能够特异性地识别并结合TRE序列。在没有四环素的情况下，TetR与TRE结合，抑制基因表达；在四环素存在时，TetR与之结合，释放TRE，允许基因表达。通过基因工程手段，TetR可以被改造成不同的形式，如tTA和rtTA。回答下列问题：

(1) TRE、TetR的基本组成单位分别是、。

(2) 四环素（Tet）诱导表达系统是一种基于大肠杆菌的Tet抗性所建立的用于诱导基因表达的调控系统，分为抑制型系统（Tet-off）和激活型系统（Tet-on）。

①结合下图分析，tTA、rtTA与TRE结合后对Tet抗性基因表达的影响是：、（从“促进”“抑制”中选填）。四环素与tTA、rtTA结合后（从“可以”“不可以”中选填）改变其构象。若要使Tet抗性基因在非调控状态处于表达状态，应选择的诱导表达系统是。

②tTA：通过将TetR与单纯疱疹病毒的VP16（病毒粒子蛋白16）的C端结构域融合而成的。rtTA：通过改变几个对四环素依赖抑制有重要作用的氨基酸残基，从而导致了一种反Tet阻遏物（rTetR）的产生，再将rTetR与VP16融合得到rtTA．推测产生tTA和rtTA的变异类型分别是、。

(3) 下图所示为科研人员预期的转基因成功的小鼠（gL）体内细胞—细胞接触的信号通路：将绿色荧光蛋白（GFP）设计为信号分子，αGFP-N-tTA融合蛋白为，完成细胞间的信息交流。操作时需获得以心肌细胞作为信号发送细胞的转基因小鼠，为保证在心肌细胞中特异性表达GFP，表达载体中应含有，构建表达载体时需要用到的工具酶有。将构建好的表达载体导入小鼠的中，同样方法获得内皮细胞特异性表达αGFP-N-tTA的转基因小鼠。将上述两种转基因小鼠杂交，经筛选获得gL小鼠。在gL小鼠中，科研人员使用LacZ基因作为报告基因。当内皮细胞与心肌细胞接触时，由于GFP和aGFP-N-tTA结合，引起，进入细胞核与tetO结合，启动LacZ基因表达，使正在与心肌细胞接触的内皮细胞呈蓝色。

综合题困难

3. 科研人员基于合成生物学远离在大肠杆菌中构建了合成产物Z的完整途径，其基因表达载体如图（a），基因1、2和3为该途径的必须基因，基因大小分别为2650 bp、1240 bp和3476 bp。回答下列问题。

(1) 图（a）中，构建基因表达载体时用到的酶是，片段X是。

(2) 基因表达载体导入大肠杆菌前，需要用Ca2+处理大肠杆菌使其处于一种的生理状态，导入后在含卡那霉素的培养基上筛选到3个抗性菌落，分别对其所含DNA进行PCE和琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图（b）。据图可知，PCR时选用的引物是对图（a）中的，选择该引物对进行鉴定的原因是；菌落B中未检测到目标条带，其原因是。

(3) 工程菌株合成产物Z的产量受到温度、pH和溶解氧等发酵条件的影响，请针对其中任一因素，探究其对产物Z产量的影响，写出简要的实验思路。

综合题困难

1. 下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（）

A. 分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列 B. 该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上 C. 若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组 D. 获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异

单选题困难

2. 下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

A. 若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 B. 抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 C. 抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA D. 已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置

单选题困难

3. 甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F₁ ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F₁花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体

单选题普通