1.
ATP 合酶可利用膜两侧H+浓度梯度中的电化学势能合成ATP。ATP 合酶β亚基蛋白(ATP5B)是ATP 合酶的主要催化亚基之一，与多种疾病有关。下图是科研人员构建ATP5B-Flag融合基因表达载体的过程示意图，请回答下列问题：
(1)
人体细胞中ATP合酶分布在。为获取ATP5B基因，可提取细胞中的，在依赖RNA的DNA聚合酶的催化作用下获得cDNA。Flag标签序列的基本单位是。
(2)
引物ATP5B-F的序列为5'CCGCGTGGATCCCCGGAATTCATGTTGAGTCTTGTGGGGCG3'，则引物 ATP5B-R应该选择(填序号) 。引物ATP5B-F和 ATP5B-R 中分别增加5'ATG3'和5'TCA3'的目的是。
(3)
经图中 PCR 过程获得产物的长度约为 bp。
(4)
免疫印迹技术是通过电泳分离蛋白质，转印至纤维膜，依次加入一抗、酶标二抗并洗去未结合的抗体，最后加底物显色。下图是利用免疫印迹技术检测ATP5B-Flag表达情况的实验结果，其中A 组为对照组， B 组为导入pcDNA3.0-ATP5B-FIng|的大肠杆菌细胞蛋白样品检测结果。
①5'TCAGTCAGTCACGATGCGGCCGCTCACTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCCGTCCCGTGCTCTTCT3'
②5'TCAGTCAGTCACGATGCGGCCGCTCAGATTACAAGGATGACGACGATAAGCGTCCCGTGCTCTTCT3'
③5'ATCGTGACTGACTGAGCGGCCGCTCACTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCCGTCCCGTGCTCTTCT3'
④5'ATCGTGACTGACTGAGCGGCCGCTCAGATTACAAGGATGACGACGATAAGCGTCCCGTGCTCTTCT3'
①制备图中马抗鼠酶标二抗时，应以作为抗原。通过抗原-抗体杂交实验检测到 Flag标签， 说明。“?”处的一抗应与特异性结合。
②为使实验结果更严谨，应该增加C组实验，C组大肠杆菌的处理方式是。预期实验结果(请在答题卡相应位置绘制)。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用;
基因工程的操作程序（详细）;
能力提升
真题演练
