PCR技术是在DNA聚合酶作用下，在体外进行DNA大量扩增的一种分子生物技术。下列叙述正确的是（）

1. PCR技术是在DNA聚合酶作用下，在体外进行DNA大量扩增的一种分子生物技术。下列叙述正确的是（）

A. 双链DNA在高温下氢键和磷酸二酯键断裂形成2条DNA单链 B. 温度降低后，单链DNA和引物结合的部分碱基序列相同 C. 以2条DNA单链为模板，以4种NTP为原料，经耐高温酶在高温下合成2个新的DNA D. 设置PCR仪的温度进行反应可重复循环多次，DNA呈指数式扩增

【考点】

PCR技术的基本操作和应用;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

真题演练

换一批

1. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来

单选题容易

2. 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（）

A. 增加模板DNA的量 B. 延长热变性的时间 C. 延长延伸的时间 D. 提高复性的温度

单选题容易

1. 为研究拟南芥植株E基因的功能，科研人员将T-DNA插入到E基因中，导致其发生突变，突变后的基因记为e。为验证某拟南芥植株的基因型，科研人员根据基因E和T-DNA的序列，设计了三种引物，引物的结合位置如图所示。已知完整的E基因和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增。科研人员提取该植株的总DNA，分别用引物“I+III”组合及“II+III”组合进行PCR，两种引物组合均能完成扩增。拟南芥植株的基因型为（）

A. Ee B. EE C. ee D. EE或Ee

单选题困难

2. 新冠疫情的快速控制，离不开政府的科学决策和我国对新冠病毒（RNA病毒）的快速检测能力。荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量，其原理是：在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成（如右图）。Ct值（循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。下列说法不正确的是（）

A. 检测新冠病毒时，需加入逆转录酶将新冠病毒RNA转化为cDNA B. PCR每个循环包括变性、退火（引物和模板结合）、延伸3个阶段 C. C_t值就越大表示被检测样本中病毒数目越多，患者危险性更高 D. 若样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解，检测结果可能为阴性

单选题普通

3. 某校学习小组进行PCR实验，甲、乙、丙三名同学分别以酵母菌为材料，进行PCR扩增，各取20ul产物进行凝胶电泳，得到的结果如下图。下列叙述错误的是（）

A. 凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱 B. 甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多 C. 丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样 D. 丙同学扩增得到的片段比甲乙同学的要大

单选题普通

1. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补酸对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧原苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 上述PCR反应体系中只加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C. 5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D. 患者该段序列中某位点的碱基C突变为G

多选题普通

2. 免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（）

A. 图示中的DNA可以是非牛乳基因中的DNA片段 B. 如果第三次冲洗不充分则有可能出现假阳性现象 C. 电泳检测结果只能判断阳性与否，无法判断牛乳中抗生素的含量 D. 微量抗原抗体反应通过PCR技术间接扩增放大，从而达到可检测的水平

多选题困难

3. 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（）

A. 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高 B. 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中 C. 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子 D. 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制

多选题普通

1. 苹果生长过程中易受真菌感染，科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中，该基因控制合成的β-1，3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术克隆BG2基因时，应选择下图中的引物（填序号），引物的作用是。

(2) 下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒，用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后，二者可连接在一起构成重组质粒，原因是。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列，PCR时可在引物（填序号）的（填“3”或“5”）端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列，其参与构成的复合启动子的作用是：①，②增强转录活性。

(3) GUS基因为常用的报告基因，只能在导入真核细胞后正确表达，而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中，GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca²⁺处理后的农杆菌共培养，然后将菌液接种至含的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌，再将其与苹果外植体共培养进行转化，通过（写出筛选过程），从而获得成功转化的受体细胞。

综合题普通

2. 为探究藏系绵羊种欧拉羊的一对相对性状长绒和短绒的遗传规律，并揭示其在羊毛发育过程中的分子机制，研究人员进行了如下的实验。

(1) 研究人员在野生型的短绒欧拉羊的10号染色体的~1023kb至~1028kb区间设计连续的重叠引物，提取突变体和野生型的进行PCR扩增，结果如图所示。

据图可知分子量较小的扩增产物与点样处的距离较(填“远”或“近”)，推测10号染色体上第对引物对应的调控序列(简称M)是突变体长绒出现的根本原因。

(2) 为了进一步证实突变体的长绒表型与调控序列M密切相关，研究人员利用表型为长绒的突变体与表型为短线的野生型作为亲本进行杂交，统计F₁随机交配后代F₂的表型及比例为长绒：短绒=9：7，然后研究人员对F₂中长绒个体的细胞进行PCR扩增以检测短绒基因在突变型与野生型中的差别，扩增结果显示F₂中长绒个体中完全没有短绒基因的比例为。

(3) 研究人员从野生型和突变体中克隆出不同长度的DNA调控序列M后，运用基因工程技术分别导入到报告基因载体中，并将含有M序列的报告基因载体转染到细胞中，以检测M调控序列对启动子活性的影响，结果如图所示。

因此图中用报告基因的表达量/内参基因的表达量用来衡量的表达水平。实验结果说明突变体的调控序列M影响下游基因的表达，且其作用的发挥与调控序列M插入的有关。与此同时，研究人员还发现在欧拉羊野生型和突变体中，基因ASIC2的表达也会影响欧拉羊短绒的发育，但是检测发现突变体ASIC2蛋白结构与野生型一致。综合上述研究推测突变体长绒表型出现的原因是。

综合题困难

3. 研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为引物a精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。