井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药，由于多年的单一使用，部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性，迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药．从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌，与其它农药相比对人体和动物安全性高．为了开发更稳定、高产的新型菌株，科研人员进行了以下研究．请回答下列问题：

（1）筛选菌株选择 （健康/患纹枯病）的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的  ， 对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据 选出编号为P12的理想菌株．

（2）鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异），扩增过程需要的酶有 ，还需要特定的  ． 对其测序后确定该菌株所属细菌类型．

（3）检测P12的细胞毒性

用人肺癌细胞系A549作为指示株系，在37℃恒温培养箱中培养．通入的空气应含 ，培养液中含少量胎牛血清，目的是 .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α（人体肠道内共生的大肠杆菌）菌液5μL加入A549细胞培养液中，4h后测定吸光值，以表示乳酸脱氢酶（LDH）的释放量．LDH是活细胞内含有的酶，当细胞受到细菌攻击时，细胞膜的 改变，LDH释放至细胞外．测定结果显示，P12对A549细胞的毒性

（4）部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因，是由于 对细菌进行长期的选择，使细菌的 发生了改变的结果．

①培养纤维素酶分解菌的土样最好选择在 环境采集．

②以下是一种培养基配方：纤维素5g、NaNO₃1g、Na₂HPO₄•7H₂O1.2g、KH₂PO₄0.9g、MgSO₄•7H₂O0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000mL）．

该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是培养基中 是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长．

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用 方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养．

一研究小组测定了某河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作来调查其水质状况．回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干 后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是 

（3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率．