井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药，由于多年的单一使用，部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性，迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药．从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌，与其它农药相比对人体和动物安全性高．为了开发更稳定、高产的新型菌株，科研人员进行了以下研究．请回答下列问题：（1）筛选菌株选择（健康/患纹枯病）的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的，对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据选出编号为P12的理想菌株．（2）鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异），扩增过程需要的酶有，还需要特定的．对其测序后确定该菌株所属细菌类型．（3）检测P12的细胞毒性用人肺癌细胞系A549作为指示株系，在37℃恒温培养箱中培养．通入的空气应含，培养液中含少量胎牛血清，目的是 .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α（人体肠道内共生的大肠杆菌）菌液5μL加入A549细胞培养液中，4h后测定吸光值，以表示乳酸脱氢酶（LDH）的释放量．LDH是活细胞内含有的酶，当细胞受到细菌攻击时，细胞膜的改变，LDH释放至细胞外．测定结果显示，P12对A549细胞的毒性（4）部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因，是由于对细菌进行长期的选择，使细菌的发生了改变的结果．

1. MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性．为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如表．

组别	培养基中的添加物	MRSA菌
1	100µg/mL蛋白质H	生长正常
2	2µg/mL青霉素	生长正常
3	2 µ g/mL青霉素+100lµ g/mL蛋白质H	死亡

请回答下列问题：

（1）青霉素的用量是该实验的变量．应保持，目的是

（2）第2组和第3组对比表明MRSA菌对有抗性，能杀死MRSA菌．

（3）蛋白质H不是新型抗生素，理由是．

（4）测定培养液中MRSA菌的活菌数量，不宜在显微镜下用直接计数，适合选用法进行计数，原因是直接计数获得的结果包含活的MRSA菌和死的RSA菌的总数，而用涂布法进行计数，计数的是菌落数，一个菌落一般来源于稀释液中的一个活菌．

填空题普通

2.

一研究小组测定了某河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作来调查其水质状况．回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是

（3）示意图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高的利用率．

填空题普通

3. 纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素．纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取．某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养．

①培养纤维素酶分解菌的土样最好选择在环境采集．

②以下是一种培养基配方：纤维素5g、NaNO₃1g、Na₂HPO₄•7H₂O1.2g、KH₂PO₄0.9g、MgSO₄•7H₂O0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000mL）．

该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是培养基中是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长．

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养．

填空题普通

1. 微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（）

A. ①②⑤⑥ B. ③④⑥⑦ C. ①②⑦⑧ D. ①③④⑤

单选题容易

2. 某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（）

A. 在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品 B. 将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测 C. 将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落 D. 判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小

多选题普通

3. 在“酵母菌纯培养”的实验课中，学生进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是（）

A. 开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧 B. 棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰 C. 在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液 D. 将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面连续划线

单选题普通

1. 我国盐碱土面积约9913万hm² ，其中pH值高于9、盐含量大于0.6%的重度盐碱地每年以1.4%的增长率增长。利用固氮微生物改善植物根际环境，是盐碱地改良的重要方法。科研人员欲从热带珊瑚岛礁的土壤中分离并鉴定耐盐碱固氮菌的单菌落，以期应用于盐碱地改良。根据所学内容，回答下列问题：

(1) 分离目的菌株时所利用的培养基从物理形态和功能上划分，属于培养基。培养基中必须添加的营养成分有；调节pH值高于9应在（填“灭菌前”或“灭菌后”）进行。

(2) 得到土壤浸出液后用法接种到培养基上可得到单菌落并进行计数；接种过程中使用的接种工具应采用灭菌；该种计数方法结果往往小于实际细菌数的原因是。

(3) 将接种后的平板置于适宜的环境中进行培养，同时将一个未接种的空白平板置于相同的环境中进行培养的目的是。

(4) 培养一段时间后研究人员可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分所获得菌落是否为固氮菌，原因是在一定的培养条件下，。实验过程中还发现在高盐、高pH、无氮培养上进行长时间培养后会出现一些特殊的菌落，将它们单独转移到新制备的高盐、高pH、无氮培养基上时却无法生长，形成这种现象的原因是。

实验探究题普通

2. 木质素是一类复杂的有机聚合物，在维管植物和一些藻类的支持组织中起着重要的结构作用，在细胞壁的形成中特别重要，特别是在木材和树皮中，因为这些部分富含木质素，从而赋予它们刚性并且不容易腐烂的特性。科研团队尝试从木材场土壤中筛选分离出木质素分解菌，实验流程如下图所示。请回答下列问题：

(1) 用于培养微生物的培养基可以为微生物提供的营养物质主要有。实验时，一般对配制的培养基采用法进行灭菌，对培养皿、烧瓶及吸管等玻璃器皿一般用法灭菌。

(2) 若每个环节的稀释倍数与步骤②的稀释倍数相同，则步骤④试管内的无菌水是mL。图示操作过程中，共将1g土壤稀释了倍。实验过程中，纯化细菌的关键是无菌操作和。

(3) ⑤纯化培养过程中所采用的接种方法是，在五个固体培养基上分别接种0.1mL该菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，若培养基上的菌落数分别为：28、70、144、139、131，则每克土壤样品中该菌的数量约为个。

实验探究题普通

3. 细胞中的HMR蛋白与PIF4蛋白有较强的亲和力，可结合形成蛋白质复合体，从而影响植物的叶生长及根伸长。科研人员构建了酵母双杂交系统进行验证。回答下列问题：

(1) 实验需选取组氨酸缺陷型酵母（无组氨酸合成能力），已知组氨酸是酵母菌生存所必需的。现欲验证实验室存留的酵母品系GS115是否为组氨酸缺陷型酵母，先用挑取保存的菌落，将其置于完全培养液中培养，该操作需在环境下进行；后将酵母培养液涂布于的固体培养基中培养，若结果为，则说明该品系为组氨酸缺陷型酵母。该过程中，先在培养液中培养的目的是。

(2) 向该酵母品系中导入下图所示的质粒（仅展示部分片段）。可以采用法完成转化。其中Gal4启动子需要与Gal4蛋白结合才能正常启动转录，Gal4蛋白分为激活区（AD）和结合区（BD）两部分，其中结合区可以识别启动子，其识别的是启动子的，激活区招募酶与启动子结合。两部分共同起作用才能激活Gal4启动子的转录，细胞质中游离的AD、BD亲和力较弱。

(3) 现构建重组载体α以表达融合蛋白HMR—BD，构建重组载体β以表达融合蛋白PIF4—AD（融合蛋白为两个蛋白质末端相连，同时具有两个蛋白质的功能且互不影响）。先将重组载体α、β（选填“分别”或“共同”）转入组氨酸缺陷型酵母，再采用法将该酵母接种到某种固体培养基进行培养，该培养基的营养成分特点是。培养一段时间后，若，则说明HMR与PIF4蛋白有较强的亲和力。

综合题困难

1. 下图所示实验方法的应用或原理，不恰当的是（）

实验方法	应用	原理
	A.分离绿叶中的色素	B.不同色素在层析液中溶解度不同
	C.细菌计数	D.逐步稀释

A. A B. B C. C D. D

单选题容易

2. 某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（）

A. 培养基pH需偏碱性 B. 泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C. 需在无氧条件下培养 D. 分离得到的微生物均为乳酸菌

单选题普通

3. β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述正确的是（）

A. 所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌 B. 通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌 C. 还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力 D. 该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发

多选题普通