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1. 天然的玫瑰没有蓝色花,这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B,而开蓝色花的矮牵牛中存在碱基序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰,下列操作正确的是( )
A.
基因B常与天然质粒连接后导入玫瑰细胞
B.
利用PCR技术扩增目的基因时,需要加入解旋酶
C.
将基因B直接导入大肠杆菌,然后感染并转入玫瑰细胞
D.
可利用抗原一抗体杂交法判断导入的基因是否成功表达
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】
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单选题
普通
基础巩固
能力提升
变式训练
拓展培优
换一批
1. PCR反应一般需要加入2种引物,引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是( )
A.
能够与两条模板链结合
B.
2种引物之间能碱基互补配对
C.
一段单链核酸
D.
引物长度通常为20~30个核苷酸
单选题
容易
2. 利用PCR 获得目的基因后,用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒,拼接后可得到重组基因表达载体,其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是( )
A.
通过PCR获取目的基因时,所选的引物可为引物2和引物3
B.
检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时,应选用引物1 和引物4进行PCR
C.
若设计的引物与模板不完全配对,可适当提高 PCR 复性的温度
D.
DNA聚合酶能与引物结合,并从引物的5'端连接脱氧核苷酸
单选题
容易
3. 聚合酶链式反应(PCR)能实现对相应核苷酸序列的大量复制,相关叙述正确的是( )
A.
该技术需要用到引物、脱氧核苷酸、解旋酶等
B.
复性是为了使解旋后的两条链恢复双螺旋结构
C.
PCR的产物通常用抗原-抗体杂交技术进行鉴定
D.
为激活相应酶,PCR反应缓冲液中需加入Mg
2+
单选题
容易
1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病,可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白,在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变,从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样,处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化,酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中,来自于氯喹抗性患者的是( )
A.
1号和6号
B.
2号和4号
C.
3号和5号
D.
1号、2号、4号和6号
单选题
普通
2. 拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶(AtRZF1)的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现,AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术(原理如下图所示)将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是( )
A.
RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用
B.
图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA
C.
图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种
D.
融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温
单选题
困难
3. 酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶(LDH)基因导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图,其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是( )
A.
构建基因表达载体时,需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶
B.
若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因,则被破坏的磷酸二酯键共有4个
C.
用PCR技术扩增LDH基因时,变性后需要先升温后降温
D.
用PCR技术扩增LDH基因时,图中的2、3分别是两种引物结合的位置
单选题
普通
1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物,将不同来源的扩增片段连接起来的方法,其过程如下图所示。下列说法错误的是( )
A.
对基因B进行PCR 需至少进行3次循环,才能获得含引物3且双链等长的DNA
B.
若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因,需要设计6种引物,其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种
C.
将第一阶段的产物(图中ab和cd)混合,先变性再复性,使能够互补配对的DNA单链相互结合,理论上有4种结合的可能,其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种
D.
引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对,因此二者不能共存于同一PCR体系中
单选题
普通
2. Sanger测序法是第一代基因测序方法,测序原理如图所示,其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸,其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是( )
A.
被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3'
B.
ddNTP可以连接到延伸的子链中,但此后子链将无法延伸
C.
合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中
D.
电泳结果共出现了12条长短不同的条带,但被测模板实际碱基数要超过12个
多选题
困难
1. 小麦是我国重要的粮食作物之一,也是盐碱地开发利用的主要作物之一、研究表明,在盐碱条件下小麦的产量损失会超过60%。为了研究小麦耐盐基因TaHKT1(用A基因表示)控制的耐盐性状,研究人员利用基因工程构建了A基因超量表达的转基因小麦。回答下列问题:
(1)
对A基因进行PCR扩增时,应选择图1中的引物
,进行图1过程时应将温度控制为
左右。
(2)
强启动子是一段有特殊序列的DNA片段,能被
识别并结合,驱动基因的
。图2表示A基因与强启动子连接在一起得到的片段,据此推测构建该片段时,切割强启动子和A基因时均用到的限制酶为
,并用
将二者连接在一起得到图示片段,将该片段继续与图2中的Ti质粒相连时,应将其插入T-DNA中,原因是
,应选择限制酶
对该DNA片段和Ti质粒进行切割。
(3)
为了检测A基因超量表达对小麦耐盐性状的影响,应如何设计实验?请写出实验思路。
。
综合题
普通
2. 驹形杆菌可合成细菌纤维素(BC)并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料,BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶(可催化酪氨酸形成黑色素)的光控表达载体,将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株,为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路(图一)。研究者利用来源于T7噬菌体的RNA聚合酶(T7RNAP)及蓝光光敏蛋白标签,构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体(光控原理见图二a,载体的部分结构见图二b)。构建载体时,选用了通用型启动子PBAD(被工程菌RNA聚合酶识别)和特异型启动子PT7(仅被有活性的T7RNAP识别)。回答下列问题:
(1)
用PCR技术扩增基因1、2、3时,所用的引物越短,引物特异性越
(填“高”或“低”)PCR反应中需要使用TaqDNA聚合酶,原因是
。
(2)
为实现蓝光控制染色,启动子①②③依次为
、
、
(填“PBAD”或“PT7”),理由是
。
(3)
将上述光控表达载体导入驹形杆菌的方法是
。
(4)
光控表达载体携带大观霉素(抗生素)抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素,其作用为
。
(5)
根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间,随后将其转至染色池处理,发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色,其原因是
。
综合题
困难
3. 番茄不耐寒,冬季容易冻坏,难以储藏。我国科研人员从某植物中提取了一种抗冻基因AtCOR15a,经过一系列过程获得转基因抗冻的番茄新品种,操作流程如图。回答下列问题:
(1)
用PCR技术扩增AtCOR15a基因时需要添加引物,引物的作用是
。
(2)
如果要将AtCOR15a基因与质粒构建重组DNA分子,一般采用双酶切法,据图分析选用的两种限制酶组合是
。
(3)
图中是采用
法将目的基因转移到番茄细胞中。
(4)
为了提高AtCOR15a基因的表达能力,可将AtCOR15a基因与外源强启动子连接,如下图所示。利用PCR检测上述连接是否正确,可选择的引物组合是
。
(5)
为了进一步提高番茄的储藏时间,可从该植物体内提取ErsI基因(乙烯受体基因),按照下图流程将ErsI基因重新导回该植物,致使该植物原有ErsI基因翻译受抑制。已知限制酶EcoRI和XhoI、BamHI切割后露出的黏性末端碱基序列不同,据图分析,提取的目的基因A、B两端需分别添加
的识别序列。推测该方法提高番茄储藏时间的机理是
。
综合题
普通