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1. 天然的玫瑰没有蓝色花,这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B,而开蓝色花的矮牵牛中存在碱基序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰,下列操作正确的是( )
A.
基因B常与天然质粒连接后导入玫瑰细胞
B.
利用PCR技术扩增目的基因时,需要加入解旋酶
C.
将基因B直接导入大肠杆菌,然后感染并转入玫瑰细胞
D.
可利用抗原一抗体杂交法判断导入的基因是否成功表达
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】
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单选题
普通
基础巩固
能力提升
变式训练
拓展培优
换一批
1. 用PCR检测某转基因植株是否导入目的基因时,电泳鉴定时发现扩增出多条条带,其原因最可能是( )
A.
引物长度过短
B.
引物之间发生配对
C.
体系中Mg
2+
浓度过低
D.
电泳时凝胶浓度过高
单选题
容易
2. PCR反应一般需要加入2种引物,引物设计是目的基因特异性扩增的关键。下列不属于引物设计要求的是( )
A.
能够与两条模板链结合
B.
2种引物之间能碱基互补配对
C.
一段单链核酸
D.
引物长度通常为20~30个核苷酸
单选题
容易
3. 利用PCR 获得目的基因后,用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒,拼接后可得到重组基因表达载体,其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是( )
A.
通过PCR获取目的基因时,所选的引物可为引物2和引物3
B.
检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时,应选用引物1 和引物4进行PCR
C.
若设计的引物与模板不完全配对,可适当提高 PCR 复性的温度
D.
DNA聚合酶能与引物结合,并从引物的5'端连接脱氧核苷酸
单选题
容易
1. 疟疾是一种严重危害人类健康的红细胞寄生虫病,可用氯喹治疗。疟原虫pfcrt基因编码的蛋白,在第76位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变,从而获得了对氯喹的抗性。现有6份血样,处理后进行PCR扩增pfcrt基因。产物用限制酶ApoI消化,酶解产物的电泳结果如图所示。1~6号血样中,来自于氯喹抗性患者的是( )
A.
1号和6号
B.
2号和4号
C.
3号和5号
D.
1号、2号、4号和6号
单选题
普通
2. 拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶(AtRZF1)的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现,AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术(原理如下图所示)将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是( )
A.
RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用
B.
图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA
C.
图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种
D.
融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温
单选题
困难
3. 酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶(LDH)基因导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为乳酸脱氢酶基因对应的DNA片段结构示意图,其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置。下列分析错误的是( )
A.
构建基因表达载体时,需用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶
B.
若从图中的DNA片段中直接获取LDH基因,则被破坏的磷酸二酯键共有4个
C.
用PCR技术扩增LDH基因时,变性后需要先升温后降温
D.
用PCR技术扩增LDH基因时,图中的2、3分别是两种引物结合的位置
单选题
普通
1. 融合 PCR 技术是采用具有互补末端的引物,将不同来源的扩增片段连接起来的方法,其过程如下图所示。下列说法错误的是( )
A.
对基因B进行PCR 需至少进行3次循环,才能获得含引物3且双链等长的DNA
B.
若通过融合PCR 技术将启动子、目的基因、终止子拼接成类似上图所示的融合基因,需要设计6种引物,其中能够起着“搭桥”作用的引物有3种
C.
将第一阶段的产物(图中ab和cd)混合,先变性再复性,使能够互补配对的DNA单链相互结合,理论上有4种结合的可能,其中在PCR体系中能进一步延伸的有2种
D.
引物2和引物3部分核苷酸序列碱基互补配对,因此二者不能共存于同一PCR体系中
单选题
普通
2. Sanger测序法是第一代基因测序方法,测序原理如图所示,其中ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸,其2、3号碳原子上没有氧原子。下列相关说法正确的是( )
A.
被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3'
B.
ddNTP可以连接到延伸的子链中,但此后子链将无法延伸
C.
合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中
D.
电泳结果共出现了12条长短不同的条带,但被测模板实际碱基数要超过12个
多选题
困难
1. 苹果生长过程中易受真菌感染,科研人员将在其他植物中发现的BG2基因转入苹果中,该基因控制合成的β-1,3葡聚糖酶可降解许多病原真菌的细胞壁,从而抑制真菌的生长与繁殖。请回答下列问题:
(1)
利用PCR技术克隆BG2基因时,应选择下图中的引物
(填序号),引物的作用是
。
(2)
下图为构建含BG2基因重组质粒的过程。研究人员用XbaⅠ和NotⅠ切割质粒,用NotⅠ和SpeⅠ切割目的基因后,二者可连接在一起构成重组质粒,原因是
。若BG2基因两端没有NotⅠ识别序列,PCR时可在引物
(填序号)的
(填“3”或“5”)端加上NotⅠ识别序列。图中增强子是一段能使基因转录频率明显增加的DNA序列,其参与构成的复合启动子的作用是:①
,②增强转录活性。
(3)
GUS基因为常用的报告基因,只能在导入真核细胞后正确表达,而在农杆菌中不能正确表达。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的营养液中,GUS能与底物发生反应使营养液呈现蓝色。将构建好的BG2重组质粒与经Ca
2+
处理后的农杆菌共培养,然后将菌液接种至含
的培养基上可筛选出含有BG2重组质粒的农杆菌,再将其与苹果外植体共培养进行转化,通过
(写出筛选过程),从而获得成功转化的受体细胞。
综合题
普通
2. 我国玉米的生产一直受到虫害的严重影响,其中鳞翅目害虫亚洲玉米螟对我国玉米生产的危害较为显著。通过基因工程育种,将抗虫基因crylAb13转入玉米,能够显著提高玉米对玉米螟的抗性。过程如图1所示,其中基因Bar为抗除草剂基因。回答下列问题:
(1)
根据基因表达载体的结构推测,抗除草剂基因Bar的作用是
。基因cry1Ab13必须插入Ti质粒的T-DNA中,原因是
。
(2)
为了减少限制酶识别序列的影响,研究人员利用无缝克隆In=Fusion技术实现过程②目的。原理如图2所示。利用限制酶
将表达载体线性化。过程①利用
技术获取基因crylAb13,该过程中要在引物1和引物2的
(填“3'”或“5'”)端增加对应表达载体中的片段。将线性化的表达载体和基因cry1Ab13混合进行In-Fusion反应,获得重组表达载体。
(3)
过程③利用构建好的重组表达载体转化经
处理过的农杆菌,然后侵染玉米愈伤组织,进而获得转基因玉米植株。研究人员探究了农杆菌浓度对基因转化效率的影响,结果如图3所示。实验结果表明,转化效率较高的农杆菌浓度范围为
OD600。为了进一步对侵染条件进行优化,可进行实验探究的课题是
。
综合题
普通
3. 巴斯德毕赤酵母以甲醇作为唯一碳源,不能合成组氨酸。科研人员利用巴斯德毕赤酵母、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、含有组氨酸合成基因的质粒生产转基因重组酵母乙肝疫苗。HBsAg基因上的两个限制酶切割位点如图1所示。请回答下列问题:
(1)
利用PCR技术扩增HBsAg基因的原理是
。设计引物是PCR技术中至关重要的一环,图2中,引物Ⅰ、引物Ⅱ中有一个设计不合理,请指出并说明原因:
。
(2)
研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为
, 用限制酶Sma Ⅰ切出的末端Ⅱ为
, 请依次写出这两种限制酶的识别序列,并用箭头标出切割位点:
、
。HBsAg基因转录时以图1中α链为模板链,则插入质粒时,酶切位点
(填“1”或“2”)离启动子更近,原因是
。
(3)
筛选成功导入重组质粒的巴斯德毕赤酵母并观察菌落的形态,所用培养基的特点为
。
综合题
普通