淀粉酶在工业生产上应用最早，迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。为了提高淀粉酶的生产水平，首先要从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株。某研究人员对所取土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作（A组）和计数操作（B组），过程如图Ⅰ。图Ⅱ是一种接种方法示意图。请回答下列问题：（1）步骤③、④所用培养基的成分，最大的区别是种类不同。（2）步骤④、⑤所用培养基的成分，最大的区别是固体培养基中添加了。步骤⑤、⑧接种时需设置未接种培养基做对照，目的是。（3）步骤⑦中，将1mL菌液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度经过步骤⑧各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.1mL），经适当培养后，2组平板上的菌落数分别为59、57、58和2、7、5。据此可得出每升菌液中的活菌数为个，据此可推测适宜的土壤稀释倍数为倍。（4）图Ⅱ所用的接种方法（填“能”或“不能”）对活菌进行计数；甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成整个接种过程，接种环要进行次灼烧灭菌，其中灭菌目的相同的是第次。

1. 淀粉酶在工业生产上应用最早，迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。为了提高淀粉酶的生产水平，首先要从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株。某研究人员对所取土样进行产淀粉酶的细菌的分离操作（A组）和计数操作（B组），过程如图Ⅰ。图Ⅱ是一种接种方法示意图。请回答下列问题：

（1）步骤③、④所用培养基的成分，最大的区别是种类不同。

（2）步骤④、⑤所用培养基的成分，最大的区别是固体培养基中添加了。步骤⑤、⑧接种时需设置未接种培养基做对照，目的是。

（3）步骤⑦中，将1mL菌液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度经过步骤⑧各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.1mL），经适当培养后，2组平板上的菌落数分别为59、57、58和2、7、5。据此可得出每升菌液中的活菌数为个，据此可推测适宜的土壤稀释倍数为倍。

（4）图Ⅱ所用的接种方法（填“能”或“不能”）对活菌进行计数；甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成整个接种过程，接种环要进行次灼烧灭菌，其中灭菌目的相同的是第次。

【考点】

微生物的分离和培养;

【答案】

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综合题普通

1. 红曲色素是广泛应用于食品等行业的天然色素，主要通过红曲霉菌发酵生产。现有商业菌株生产红曲色素能力低，且会产生对动物肾脏、肝脏有毒害的桔青霉素。科研人员拟获得优质红曲霉菌。

(1) 将待选菌样品接种到含大米研磨液的液体培养基中，扩大培养2 天后进行，依次分别涂布于固体培养基上培养，通过观察特征对菌种进行初步鉴定。

(2) 以菌株为对照进行发酵指标的比较，初步筛选出3种菌株。选取4种大米为基质进行发酵，结束后检测相应物质的含量，结果如图1。

应选择作为目标菌株进行后续生产研究。

(3) 氮源种类及发酵温度对所选红曲霉菌代谢产物合成的影响如图2所示。

根据所有研究结果，依次写出红曲色素发酵罐中优选的碳源、氮源及控制的温度条件。

综合题普通

2. 测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基，伊红美蓝遇上大肠杆菌呈黑色）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：

(1) 过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在旁进行。

(2) 将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于培养基，制备培养基时需要采用法灭菌。为了检测该培养基灭菌是否彻底，对于该培养基应采用的检测方法是。

(3) 某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的100mL菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为个。

综合题普通

3. 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

(1) 在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于培养基。

(2) 纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。

(3) 通常情况下，无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免。

综合题普通