回答下列问题：

步骤1：取大肠杆菌菌液均匀涂布在培养基平板上，并将平板划分为四个大小一致的区域。①区域放1张不含卡那霉素的圆形滤纸片，②～④区域各放1张含卡那霉素的相同圆形滤纸片，在适宜条件下培养12～16h，测量并记录抑菌圈的直径，记为N₁。

步骤2：从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌配制成菌液，重复上述步骤，培养至第五代。测量并记录每一代抑菌圈的直径，依次记为N₂～N₅。

回答下列问题。

注：+越多，表示GUS基因产物经染色后颜色越深

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲，这种培养基属于 。

(2)培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌。

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 .

(4)乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括 、 、离子吸附法及交联法等。