1.

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下:

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲,这种培养基属于 。

(2)培养微生物L前,宜采用 方法对接种环进行灭菌。

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下,带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量越 .

(4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化,可通过检测固定化乳糖酶的 确定其应用价值。除化学结合法外,酶的固定化方法还包括 、 、离子吸附法及交联法等。

【考点】
微生物的分离和培养; 培养基对微生物的选择作用; 现代生物技术在育种中的应用;
【答案】

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1.

回答下列关于微生物的问题.

阿拉伯胶是一种多糖,研究者从某地合欢树下距离地表深10~15cm处的土样中初筛到能降解阿拉伯胶的菌株SM01,以下为该菌株的鉴定过程.

(1)筛选所用的选择培养基只能以 作为唯一碳源,其原因是

(2)SM01的菌落为粉白色,菌落初期呈突起絮状,在显微镜下观察到其菌丝白色致密,且有分生孢子,细胞核直径约lμm,初步推测为真菌.下列属于SM01肯定具有的结构和特征是 (多选).

A细胞膜  B核糖体  C拟核  D荚膜  E芽孢  F菌盖  G细胞核  H分生孢子

(3)在分离纯化菌株时,通常使用的划线工具是 .如图1示某种划线法操作后菌落生长状况,数字表示划线顺序.某同学以同样方法对某个平板划线后,经一段时间培养,发现第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域的第一条线上无菌落,其它划线上有菌落.造成划线无菌落可能的操作失误可能是 .

(4)为探究阿拉伯胶的降解机制,将该菌种的培养液过滤离心,取上清液做如图2所示实验.该实验的假设是 .为什么说该实验设计不合理? 

(5)请根据(4)小题的分析完善其实验设计. 

(6)在阿拉伯胶降解酶运用到工业生产前,需对该酶的最佳温度范围进行测定.图3中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比.将酶在不同温度下保温足够长的时间,再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性,由此得到的数据为酶的热稳定性数据,即图3的曲线②.据图判断下列叙述错误的是 .

A.该酶只能在最佳温度范围内测出活性

B.曲线②35℃数据点是在80℃时测得的

C.曲线①表明80℃是该酶活性最高的温度

D.曲线②表明该酶的热稳定性在70℃之后急剧下降.

填空题 普通
3.

井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药,由于多年的单一使用,部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性,迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药.从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌,与其它农药相比对人体和动物安全性高.为了开发更稳定、高产的新型菌株,科研人员进行了以下研究.请回答下列问题:

(1)筛选菌株选择 (健康/患纹枯病)的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后,取适量培养液涂布于琼脂平板上,培养5天后,挑选形态不同的  , 对其进行编号.然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上,培养3天后,观察纹枯菌的生长,根据 选出编号为P12的理想菌株.

(2)鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA,扩增其16S rDNA(能体现不同菌属之间的差异),扩增过程需要的酶有 ,还需要特定的  . 对其测序后确定该菌株所属细菌类型.

(3)检测P12的细胞毒性

用人肺癌细胞系A549作为指示株系,在37℃恒温培养箱中培养.通入的空气应含 ,培养液中含少量胎牛血清,目的是 .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α(人体肠道内共生的大肠杆菌)菌液5μL加入A549细胞培养液中,4h后测定吸光值,以表示乳酸脱氢酶(LDH)的释放量.LDH是活细胞内含有的酶,当细胞受到细菌攻击时,细胞膜的 改变,LDH释放至细胞外.测定结果显示,P12对A549细胞的毒性

(4)部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因,是由于 对细菌进行长期的选择,使细菌的 发生了改变的结果.

填空题 普通