将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如图所示的实验。下列叙述正确的是（）

1. 幽门螺旋杆菌（能分解对热不稳定的尿素）是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病菌。从带菌者胃黏膜样本中分离出该细菌，下列相关实验步骤和方法不合理的是（）

A. 幽门螺旋杆菌可通过合成脲酶来分解利用尿素 B. 尿素分解后培养基中pH升高，可利用酚红指示剂进行鉴定 C. 选择培养基应以尿素为唯一氮源，制备时应先灭菌后加入无菌尿素 D. 若要判断选择培养基是否起到作用，需要设置未接种的培养基作为对照组

单选题普通

2. 野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，赖氨酸营养缺陷型突变菌由于发生基因突变只能在添加了赖氨酸的培养基上生长。下图为以野生型菌株为材料，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷突变株的部分流程图，数字代表培养基，A，B，C表示操作步骤。下列有关说法正确是（）

A. 野生型大肠杆菌能够合成所需的全部氨基酸，因此培养基中无需提供氮源 B. ①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸 C. 需将①中的菌液适当稀释后，用接种环蘸取菌液在②上进行划线接种 D. 从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株

单选题普通

3. 为了获得所需要的微生物，可以通过选择培养及鉴别培养来进行筛选。下列叙述错误的是（　　）

A. 从样品中筛选所需要的微生物时只能使用固定培养基 B. 培养基中加入抗生素能筛选出具有相应抗性的微生物 C. 尿素分解菌能够将尿素分解为氨，使酚红指示剂变红 D. 纤维素分解菌能分解纤维素，使菌落周围出现透明圈

单选题普通

1. 土壤中95%以上的磷为植物很难利用的无效磷。解磷菌能够将磷矿粉等无效磷转化为植物易利用的速效磷。科研人员将磷矿粉制成培养液，培养从土壤中分离出的3种解磷菌（M-3-01、B3-5-6、T1-4-01），测定培养液的上清液中pH和速效磷含量，结果如下图，下列叙述正确的是（）

A. 3种解磷菌是用只含磷矿粉的培养基分离出来的 B. 由图2可知，在72h以内M-3-01解磷能力最强 C. B3-5-6转化磷矿粉的能力与培养溶液pH显著相关 D. 据图推测B3-5-6可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉

多选题普通

2. 某些土壤细菌能合成脲酶，可将尿素分解成CO₂和NH₃ ，供植物吸收和利用。使用特定的选择培养基能分离土壤中分解尿素的细菌。下列相关叙述错误的是（）

A. 在施用过尿素的土壤中取样，更易得到尿素分解菌 B. 该选择培养基要以尿素为唯一碳源 C. 通常要对土样进行充分稀释，再涂布到平板上培养 D. 培养过程中平板上出现多种菌落，则可判定平板已被外来杂菌污染

多选题普通

1. 水稻恶苗病主要由镰刀菌引起，是水稻苗期至穗期的主要病害之一。研究人员开展相关实验，从水稻根基土壤中筛选水稻恶苗病拮抗菌，并探究其抗菌机制。相关实验过程如图所示。

回答下列问题：

(1) 步骤①中需从（填“患病”或“健康”）的水稻根基土壤获取菌株。步骤②和③中“a”表示。接种后在28℃条件下培养1-2天，根据对步骤④中获得的纯培养物进行初步的鉴定和分类。

(2) 按照步骤⑤进行拮抗菌筛选，在甲处接种等量的拮抗菌菌株J1、J2后，培养一段时间，结果如图所示。据图判断，的抑菌效果更佳，依据是。该实验还需设置对照组，对照组的操作是。

(3) 用去除拮抗菌菌株J1后的无菌发酵液处理病原菌菌丝体，发现菌丝明显变短，推测拮抗菌抑菌的原理是。

(4) 实验筛选出的菌株需要先进行大田种植试验以检测防治效果，原因是。

实验探究题普通

2. 为探究卡那霉素对大肠杆菌的选择作用，科研人员进行了如下图所示的实验。

步骤1：取大肠杆菌菌液均匀涂布在培养基平板上，并将平板划分为四个大小一致的区域。①区域放1张不含卡那霉素的圆形滤纸片，②～④区域各放1张含卡那霉素的相同圆形滤纸片，在适宜条件下培养12～16h，测量并记录抑菌圈的直径，记为N₁。

步骤2：从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌配制成菌液，重复上述步骤，培养至第五代。测量并记录每一代抑菌圈的直径，依次记为N₂～N₅。

回答下列问题。

(1) 细菌耐药性变异一般来源于，该变异产生于抗生素广泛使用（填“前”或“后”）。

(2) 随着培养代数的增加，抑菌圈直径的数据从N₁→N₅会逐渐。从进化的角度解释该现象：大肠杆菌之间的抗药性存在差异，由于卡那霉素对大肠杆菌进行，具有抗性的细菌存活并繁殖，细菌群体中的基因频率逐渐升高，使该细菌种群朝着对卡那霉素抗性增强的方向不断进化。

(3) 人类不断研发和使用新的抗生素，细菌对新药的耐药性也在不断提高。根据实验结果，从维护人类健康的角度出发，请你给出使用抗生素的建议。

实验探究题普通

3. 高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节，其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种：AtACS4和AtACSS为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系，科学家将AtACS4和AtACS5的基因分别和GUS报告基因融合，并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱，kan'为卡那霉素抗性基因，Amp'为氨苄青霉素抗性基因。据此回答下列问题：

	幼嫩根	幼嫩叶	成熟根	成熟叶
AtACS₄		艹	++	++++
AtACS₅	+	++++	++	++

注：+越多，表示GUS基因产物经染色后颜色越深

(1) 目的基因的克隆：根据AtACS4和AtACS5序列信息，设计引物对目的基因PCR扩增，对扩增产物进行电泳。制备凝胶时选择合适的梳子来制备样品孔，插入齿梳的时间应在琼脂糖凝固(“前”或“后”)。电泳过程中，凝胶点样孔端应靠近电泳槽极接口，电泳完成后切胶回收DNA，测序验证。

(2) 构建重组DNA分子：测序后可知所得条带确为实验所需条带且无突变。为使目的基因正确插入载体相应位置，设计引物时，在目的基因两端分别引入两种限制酶的识别序列。用酶处理PCR所得的DNA片段与空载体(未插入目的基因的载体)，可获得重组DNA 分子。

(3) 将重组DNA 导入农杆菌：用氯化钙处理后的农杆菌，发生了变化，成为感受态细胞。低温下将农杆菌与重组DNA混匀，使外源DNA粘附与受体细胞表面，最后短暂热刺激，使外源 DNA 进入受体细胞。将受体菌接种在(“含”或“不含”)抗生素的培养液中，慢速培养一段时间，使细胞恢复回正常状态，并表达相关基因。两小时后，再将农杆菌溶液涂布于添加了的LB平板进行筛选。

(4) 农杆菌转化拟南芥：将转基因农杆菌与消毒处理拟南芥叶片共同培养，共同培养后的拟南芥叶片转入含氨苄青霉素的固体培养基，进行多次培养，主要目的是除去农杆菌和筛选转化的植物细胞。若培养基中氨苄青霉素浓度太低，可能会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行检测。经过发芽和生根培养后的组培苗，在移栽大田前需进行炼苗，炼苗的作用是。

(5) 拟南芥乙烯合成酶的表达特点：使用GUS染液染色后，具GUS基因表达产物的部位会现蓝色，用肉眼可看到，且一定程度下染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS₄和AtACS₅的启动子和GUS报告基因融合后进行转化、染色后获得的实验结果如上表，可以推测启动子在幼嫩植铢的叶片中表达量更高，AtACS₄在根中的表达情况是。

综合题困难

1. 某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（）

A. 培养基pH需偏碱性 B. 泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C. 需在无氧条件下培养 D. 分离得到的微生物均为乳酸菌

单选题普通

2. 某大肠杆菌能在基本培养基上生长，其突变体M和N均不能在基本培养基上生长，但M可在添加了氨基酸甲的基本培养基上生长，N可在添加了氨基酸乙的基本培养基上生长，将M和N在同时添加氨基酸甲和乙的基本培养基中混合培养一段时间后；再将菌体接种在基本培养基平板上，发现长出了大肠杆菌（X）的菌落。据此判断，下列说法不合理的是（）

A. 突变体M催化合成氨基酸甲所需酶的活性丧失 B. 突变体M和N都是由于基因发生突变而得来的 C. 突变体M的RNA与突变体N混合培养能得到X D. 突变体M和N在混合培养期间发生了DNA转移

单选题普通

3.

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是。从功能上讲，这种培养基属于。

(2)培养微生物L前，宜采用方法对接种环进行灭菌。

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 .

(4)乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括、、离子吸附法及交联法等。

填空题普通