①获得GFP基因。方法一：可从库中获得GFP基因的序列信息，再通过人工合成的方法获得。方法二：以含GFP基因的质粒作为进行PCR，扩增得到大量GFP基因。

②制备重组质粒。将基因的启动子和GFP基因相连后，再与质粒相连。

③导入受体细胞。将重组质粒导入斑马鱼的受精卵，选择受精卵为受体细胞的原因是。

④筛选G品系斑马鱼。若在荧光显微镜下观察小鱼的各个器官时发现，表明成功得到G品系斑马鱼。

⑤筛选纯合G品系斑马鱼。鉴定GFP插入的位置，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对GFP基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图1所示。将G品系斑马鱼相互交配，提取不同子代个体的DNA用引物1、2进行PCR并电泳，结果如图2所示。加样孔对应的个体是纯合G品系斑马鱼。若改用引物3、4进行PCR并电泳，加样孔对应的个体是纯合野生型斑马鱼。

①首先，用PCR技术扩增dsx内含子，应选择图1中的引物是（选填字母）。在PCR反应体系中除了添加模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、4种dNTP外，缓冲液中一般需要添加，其作用是。获得PCR产物后需要进行琼脂糖凝胶电泳实验以便进行相关基因测序。制作凝胶时，将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，目的是。

②然后将扩增的dsx内含子序列插入RTA基因的内部，再连接序列，构建含融合基因1的表达载体。

③最后将含融合基因1的表达载体导入东方果蝇的（填受体细胞名称）中进一步获得转基因果蝇。判断转基因雌蝇中的成熟mRNA为图2中的（填字母序号）。

①欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，先要推测对应的，再经定点突变获得融合基因2（如图3所示）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，要求标明每条链的5^'端和3^'端。

②对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：

i：在29℃收集雄性果蝇（G₀）。

ii：G₀与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G₁）。

ⅲ：将每对亲本的受精卵（G₁）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G₁具有cs效应。

iv：在℃继续培养具有cs效应的G₁果蝇，并使其连续多代相互交配，得到转基因纯合子。