1.
东方果蝇繁殖力强，雌蝇产卵于果皮下，幼虫孵化后钻入果肉中蛀食，造成水果腐烂失去商品价值。研究发现，东方果蝇中dsx基因转录出的前体RNA在加工过程中具有独特的性别选择性剪接机制，仅雌果蝇的dsx基因转录出的前体RNA中内含子转录序列会被剪切掉。蓖麻毒素A（RTA）可通过破坏核糖体导致细胞死亡。利用以上信息研发雌性特异性致死基因系统来控制雌蝇的危害，请回答下列问题：
(1)
研究者获得如图1所示的融合基因1，进而得到转基因果蝇。
(2)
研究发现，RTA蛋白第212位甘氨酸替换为精氨酸会出现冷敏感效应（cs），即当温度由29℃变为18℃时，可抑制RTA蛋白对细胞的致死作用。利用此特性培育纯合转基因果蝇。
①首先，用PCR技术扩增dsx内含子，应选择图1中的引物是（选填字母）。在PCR反应体系中除了添加模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、4种dNTP外，缓冲液中一般需要添加，其作用是。获得PCR产物后需要进行琼脂糖凝胶电泳实验以便进行相关基因测序。制作凝胶时，将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，目的是。
②然后将扩增的dsx内含子序列插入RTA基因的内部，再连接序列，构建含融合基因1的表达载体。
③最后将含融合基因1的表达载体导入东方果蝇的（填受体细胞名称）中进一步获得转基因果蝇。判断转基因雌蝇中的成熟mRNA为图2中的（填字母序号）。
①欲得到具有cs效应的RTAcs蛋白，先要推测对应的，再经定点突变获得融合基因2（如图3所示）。请在方框中画出可继续延伸的复性结果，要求标明每条链的5'端和3'端。
②对转入融合基因2的果蝇进行以下操作：
i：在29℃收集雄性果蝇（G0）。
ii：G0与野生型果蝇杂交，筛选出转基因受精卵（G1）。
ⅲ：将每对亲本的受精卵（G1）均分为两组，分别在18℃和29℃孵化培养，统计两组中雄性个体所占比例，若，则说明G1具有cs效应。
iv：在℃继续培养具有cs效应的G1果蝇，并使其连续多代相互交配，得到转基因纯合子。
【考点】
蛋白质工程;
基因工程的操作程序（详细）;
能力提升
真题演练
