基因工程中，常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，主要原因是(　　)

1. 抗菌肽对治疗癌症有一定作用，下图表示抗菌肽的合成过程。下列相关说法正确的是（）

A. 用PCR技术克隆目的基因不需要DNA解旋酶 B. 基因表达载体包含起始密码子和终止密码子 C. 用显微注射法将基因表达载体导入毕赤酵母细胞 D. 筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质

单选题容易

2. 下列关于基因文库的叙述，正确的是（）

A. 可以根据目的基因的有关信息，从基因文库中获取目的基因 B. 基因组文库中基因不具有内含子，部分基因文库中具有 C. 基因组文库中基因不具有启动子，部分基因文库中具有 D. 基因组文库中基因可以在物种间交流，部分基因文库不可以

单选题容易

3. 下列关于基因文库的叙述，不正确的是（）

A. 玉米基因组文库中的基因与其cDNA文库中的基因相同 B. 多肉植物珍珠吊兰的基因组文库包含了该生物所有的基因 C. 利用cDNA文库可研究某个基因在不同组织中的表达情况 D. 可以从小鼠肝脏细胞的cDNA文库中获取ATP合成酶基因

单选题容易

1. 将一段编码序列（CDS）插入到一个载体上，将该载体命名为pVN2024。如图A所示，将CDS插入到载体的SacⅡ位点，该位点位于lacZ基因的MCS区（含多个酶切位点），CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点。为确认CDS的大小和插入方向，科研人员用不同的限制酶切割重组质粒并进行电泳，结果如图B。下列说法错误的是（）

A载体示意图，方框内表示载体中限制酶识别位点；B不同限制酶切割产物的电泳示意图，M为标准电泳条带

A. SpeⅠ酶切可用于判断CDS插入的方向 B. 与lacZ基因相比，CDS插入时方向相反 C. CDS长度为2.6kb，在距一端0.5kb处有一个EcoRI识别位点 D. 若重组质粒同时用EcoRⅠ和SpeⅠ酶切，电泳能检测到4个不同条带

单选题困难

2. Hv-Lv肽链是抗体与抗原识别并结合的关键结构。为筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链，将编码Hv-Lv肽链的DNA片段与丝状噬菌体固有外壳蛋白pⅧ的基因连接并一起表达，最后用固定化抗原筛选（过程如图）。

下列说法错误的是（）

A. Hv-LvDNA片段上游需要设计并连接启动子 B. Hv-LvDNA片段上无需连接标记基因 C. 目标是获得能耐受多次冲洗的噬菌体 D. 实验过程须严格遵循生物防护措施

单选题困难

3. 研究人员用限制酶BamHI、SalI切割X基因和pBR322质粒，以构建基因表达载体。对受体细胞大肠杆菌进行转化和筛选，导入目的基因过程中，受体菌存在未导入质粒、导入空质粒（不含目的基因的pBR322质粒）或导入重组质粒的情况。下列有关分析错误的是（）

A. 用BamHI和SalI同时切割有利于X基因正确插入pBR322质粒 B. 培养基添加氯霉素可筛选未导入质粒和导入质粒的受体菌 C. 培养基添加四环素可筛选未导入质粒与导入重组质粒的受体菌 D. 用X基因的引物进行扩增可对转化后的大肠杆菌进行鉴定

单选题普通

1.

科学家将基因A（人的生长激素基因）与pBR322质粒进行重组，得到的重组质粒导入牛的受精卵，使其发育为转基因牛，再通过细胞工程培育为转基因克隆牛。pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点（如图2）。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题。

（1）图1中显示的人的生长激素基因是通过人工合成的，图中①过程需要的酶是________，图中②过程需要的酶是________。

A．解旋酶 B．DNA聚合酶 C．RNA聚合酶 D．逆转录酶

（2）图1中的mRNA是从人体的哪种组织细胞中获取的______。

重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示：

（3）如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的________。

（4）如果受体菌在培养基A上不能生长、繁殖形成菌落，而在培养基B上能生长、繁殖，则即目的基因插入了________中。在进行工程菌筛选时，在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的大肠杆菌，这是因为________。

科研人员还发现，基因B（胸腺素β4基因）在提高动物绒毛产量方面有重要作用，构建表达载体的过程如下图所示：

（5）片段D是基因B中的某一片段，下列叙述错误的是______。

A. 该图中含有两个密码子

B. 图中③和④代表两个不同的脱氧核苷酸

C. 若只用该片段中的3个碱基对，可以排列出4³种片段

D. 搭建该片段中的3个碱基对，需要磷酸和脱氧核糖之间的连接物6个

（6）用基因B和质粒构建重组质粒后用EcoRI完全酶切并进行电泳观察，可出现长度为1.1kb和________kb，或者________kb和________kb的片段。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）

综合题普通

2. 金属硫蛋白（MT）属于重金属结合蛋白，能够吸收土壤中的镉，蚯蚓的体内富含 MT，可通过基因工程技术将蚯蚓 MT 基因转入烟草中，使烟草获得结合重金属的能力。回答下列问题：

（1）获取 MT 基因：从蚯蚓组织中提取 mRNA，用于构建文库。

（2）构建基因表达载体：用两种不同限制酶切割质粒与目的基因的目的是（答出1 点即可）。

（3）导入受体细胞：烟草为双子叶植物，科研人员常用法将基因表达载体导入受体细胞，利用该方法可使目的基因在受体细胞中得以稳定维持和表达的机制是。

（4）目的基因的鉴定：个体水平对目的基因是否翻译出具有功能的蛋白质进行鉴定的方法是。

（5）利用转基因烟草修复重金属镉污染土壤的优点有（答出 2 点即可）。

综合题普通

3. 转基因生物培育成功的关键是保证目的基因在受体中的正常表达或抑制特定基因的表达。在这个过程中，根据获得的目的基因不同、采取的措施不同等，培育时选择的方法也不相同。回答下列相关问题：

（1）利用乳腺生物反应器获得胰岛素的过程中，为保证通过反转录法获得的胰岛素基因能正常表达，在构建基因表达载体时需将获得的含目的基因的片段连接在之间，然后通过的方法将基因表达载体导入中。

（2）为降低耐除草剂转基因水稻通过花粉传播而引起的环境生物安全问题，一是利用转入的耐除草剂基因的位置进行控制，如；二是将耐除草剂基因拆分为两部分，只有两部分片段同时存在才具有耐除草剂的特性，请提出可行的措施：。

（3）下图中插入颠倒的转录区的目的是，其原理可能是颠倒的转录区与转录区形成的RNA通过原则形成双链而无法使转录区形成的RNA与核糖体结合。

综合题困难

1. 科研人员为了培育出能产生人胰岛素的大肠杆菌，先从人的体细胞中获取含目的基因的DNA片段。如图表示培育转基因大肠杆茵所用的质粒及含目的基因的DNA片段。回答下列问题：

(1) 图中5种限制酶中，在切割DNA时可形成相同黏性末端的是。

(2) 构建重组质粒时，不能使用EcoR I、Sal I和Nhe I进行切割，原因分别是。

(3) 利用PCR技术扩增目的基因时，需要设计甲、乙2种引物．其中甲引物上有5＇-CAATTG-3＇序列，乙引物上应有序列。甲引物应能与目的基因的（填“A”或“B”）端的单链互补配对。扩增过程中，一次循环包括变性、复性和延伸三步、其中温度最高的一步是。

(4) 已知β-半乳糖苷酶能分解无色的X-gal产生蓝色物质，在筛选转基因大肠杆菌时，所用培养基中除了含有水、无机盐、碳源和氮源以外，还应有氨苄青霉素和X*-gal，在平板上出现的菌落有的呈蓝色、有的呈白色、其中色的菌落有目的菌。请写出判断依据是。

综合题普通

2. 为了提升猪瘟病毒疫苗的效果，科研人员构建了猪瘟病毒p30蛋白基因（p30）与白喉毒素无毒突变基因（CRM197A）的融合基因表达质粒，以生产融合蛋白疫苗。图1为质粒构建、疫苗生产以及效果测试示意图，请回答下列问题：

(1) 除图1中所示结构外，pET32a质粒上还具有的结构是，终止子的功能是。

(2) 引物F1-F的设计依据是质粒上游同源序列和。通过PCR分别扩增p30基因和CRM197A 基因时配制的两个反应体系中相同的物质有：缓冲液（含Mg²⁺）、无菌水、等，缓冲液的功能是。

(3) 筛选时科研人员挑选了5个菌落，提取质粒后加入BamHI、Hind Ⅲ酶切、电泳。结果如图2所示。可初步判断号菌落含有构建成功的融合基因表达质粒。p30和CRM197A基因（选填“含”“不含”） BamHI、Hind III酶切位点，理由是。

(4) 为进一步确认质粒构建成功，科研人员检测上述菌落后发现某个菌落中同时含有空载质粒和融合基因表达质粒，可能的原因是。

(5) 为验证融合蛋白疫苗的效果，科研人员将p30蛋白、p30-CRM197A融合蛋白分别注射到小鼠体内，检测抗体含量，结果如图3所示。据此可以判定融合蛋白疫苗效果更好，依据有。深入研究表明某些抗原呈递细胞表面有，识别、摄取CRM197A的同时也促进了 p30的摄取，从而加强了疫苗效果。

综合题普通

3. 炎症性肠病(IBD)是一种易导致结肠癌的慢性疾病，患者肠道内会产生硫代硫酸盐，且生成量与疾病严重程度呈正相关。为简化疾病诊断和精确用药，科研人员开发了智能工程菌。

(1) 科研人员将抗炎蛋白基因与硫代硫酸盐特异性诱导激活的启动子P连接，构建出图1所示表达载体。先用Ca²⁺处理大肠杆菌细胞，使细胞处于的生理状态，再将表达载体导入其中，筛选得到菌株E。饲喂菌株E的IBD小鼠症状明显缓解。选用启动子P的优点是仅在IBD发生时才表达抗炎蛋白且，能精准治疗IBD。

(2) 科研人员拟向菌株E中导入新元件，得到菌株Ec，以通过观察饲喂菌株Ec的小鼠粪便中的荧光情况来诊断IBD严重程度。制备新元件有图2所示两种方案。

①与方案1相比，方案2的主要优势是排除不同的小鼠粪便样品中对诊断结果的影响。

A. Ec菌数量差异 B. Ec菌活性差异 C.硫代硫酸盐含量

②利用方案2所获得的Ec菌饲喂IBD小鼠后，若粪便样品中仅发红色荧光的菌为x个，同时发红色和绿色荧光的菌为y个，则反映IBD 发病程度的数学表达式为。

(3) 硫代硫酸盐易被分解，因此Ec菌荧光情况的观察只能反映观察时刻的情况。为了让曾经患过IBD的情况被记录下来，科研人员继续向菌株Ec中导入含图3所示元件的表达载体，得到智能工程菌R。正常的LacZ基因编码的蛋白可使大肠杆菌菌落在含X-gal(无色)的培养基上呈现蓝色。突变基因A-LacZ无法表达LacZi酶，B-sgRNA能使突变基因A-LacZ 恢复正常序列。

给小鼠饲喂智能工程菌R后，收集小鼠粪便中的工程菌R，将工程菌R涂布在含的平板上，若，则说明小鼠曾患IBD。

综合题普通

1. 下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（）

A. 分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列 B. 该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上 C. 若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组 D. 获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异

单选题困难

2. 下列关于基因工程的叙述，正确的是（）

A. 若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 B. 抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 C. 抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA D. 已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置

单选题困难

3. 甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F₁ ，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下对相关操作及结果的叙述，错误的是（）

A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F₁花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体

单选题普通