随着科技的发展，生物降解有机化工物质已成为解决环境污染的一种重要手段。氯苯（C6H5Cl）是一种有机化工物质，不易降解，传统手段一般会做土壤掩埋处理，但会污染环境。某实验小组欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物，为解决氯苯的污染问题提供理论依据。回答下列问题：

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1. 随着科技的发展，生物降解有机化工物质已成为解决环境污染的一种重要手段。氯苯（C₆H₅Cl）是一种有机化工物质，不易降解，传统手段一般会做土壤掩埋处理，但会污染环境。某实验小组欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物，为解决氯苯的污染问题提供理论依据。回答下列问题：

(1) 为了获得能降解氯苯的微生物菌种，可在取样，并应选的培养基进行选择培养。除此之外，培养基中一般还应含有、无机盐和蒸馏水等。

(2) 在对目的微生物分离纯化时，所用接种方法必须使用接种环的是法。若用该方法进行接种，则一般在处获取目的菌的单菌落。

(3) 在用液体培养基培养降解氯苯的微生物时，需要设置对照组验证培养基是否灭菌合格，则对照组的设置操作为。培养基的灭菌方法般为。

【考点】

微生物的分离和培养; 灭菌技术;

【答案】

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实验探究题普通

1. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

(1) 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

(2) 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

(3) 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

(4) 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

实验探究题普通

2. 某兴趣小组研究使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响，实验选用凉拌黄瓜、盐水虾、干锅树菇3道菜，每道菜均分为3盘，一盘使用公筷，一盘不使用公筷，还有一盘不食用，实验者分别使用公筷和不使用公筷吃3道菜，同一实验者吃同一道菜的次数必须相同，实验流程如图所示。请据图回答：

(1) 图示流程中，应使用对样品进行稀释，接种时所用的接种工具是。对培养基X进行灭菌时，通常使用法。

(2) 图中存在“冷藏”操作，进行该操作的目的是。实验结束后，培养基应进行处理再丢弃。

(3) 实验结果如表所示：

菜名	总菌数（cfu/kg）
	餐前	餐后
	餐前	公筷	非公筷	未食用
凉拌黄瓜	14000	16000	45000	14500
盐水虾	135	150	220	140
干锅茶树菇	30	45	530	40

结合生物学知识及常识分析，筷子上的微生物可能来自（答出两点）；与凉拌黄瓜组相比，盐水虾和干锅茶树菇两组的总菌数较少的主要原因是。基于上表和该兴趣小组的实验课题，可以得出的结论是。

实验探究题困难

3. 随着我国畜禽产业迅猛发展，废弃羽毛亟需进行有效开发利用。

(1) 羽毛中含有丰富的角蛋白，不易被化学试剂分解，但自然界中少有羽毛长时间积聚，这一现象提示在的环境中易找到羽毛分解菌。

(2) 为筛选土壤中的羽毛分解菌，研究者进行如下操作：

①取土样→配置浓度梯度土壤溶液→涂布于基础培养基表面，培养一段时间后，挑取单菌落接种于的液体培养基中振荡培养。此过程使用的培养基用法灭菌，羽毛煮沸消毒并烘干。

②以为对照，观察羽毛降解情况并检测角蛋白酶的酶活，结果如下表。

菌株	A	B	C	D	对照
羽毛降解情况
酶活相对值	3	10	8	2	0

据表判断，适合后续研究的菌株及依据。

(3) 为优化角蛋白酶的生产条件，研究者利用响应面法进行了多变量分析。首先选择起始pH、温度、培养基中羽毛含量三个变量分别进行实验。依据相关软件推荐的不同变量组合实施多变量实验，并根据实验结果绘制了每两种变量组合对角蛋白酶活影响的三维图，部分结果如图。

图中投影的等高线反映了不同条件下角蛋白酶活的变化。由图可知：等高线中最小图形的中心点代表时的温度和羽毛含量；等高线酶活随温度和羽毛含量增加的变化趋势（“相同”或“不同”）。等高线若为圆形，提示两个变量间交互作用弱，据图判断，温度与羽毛含量间。根据测定结果建立模型，计算出最优组合，并进行验证，测得角蛋白酶活比优化前提高了数倍。

(4) 该研究潜在的应用前景是发酵液中富含氨基酸可用于。

实验探究题困难