1.
为研究杜仲EuDIRI基因（简称E基因）过量表达对番茄灰霉病（由灰霉菌引起）的抗性影响，科研人员利用PCR扩增目的基因，构建E基因过表达载体并转化番茄细胞。在得到若干株转基因番茄后检测相关指标以验证E基因在番茄中的作用。下图为基因表达载体部分示意图。回答下列问题：
（注：GUS是报告基因，其基因表达产物能将无色的X-Gluc转化为蓝色物质）
(1)
进行PCR扩增时，利用E基因序列内部特异性较（填“高”或“低”）的区域设计个引物，退火温度的设计与引物的有关。
(2)
在构建E基因过表达载体时，需要借助酶将获取的目的基因和农杆菌的Ti质粒进行切割和连接。将构建好的重组Ti质粒导入农杆菌细胞时，通常需要用处理农杆菌，从而有利于重组Ti质粒进入其体内。形成的重组Ti质粒需要先导入农杆菌细胞，再侵染番茄细胞的理由是。
(3)
科研人员利用技术将被侵染的番茄细胞培育成新植株幼苗，将幼苗叶片浸泡在含有X-Gluc的反应液体系中，一定时间后，转入70%乙醇溶液进行处理1—3小时，观察叶片是否出现蓝色斑点，从而筛选出目标植株。筛选出的植株还需通过PCR技术、核酸分子杂交和（填2种）等方法进一步鉴定。
(4)
为研究E基因如何增强番茄对灰霉病的抗性，科研人员检测了野生型（WT）、转空载体（EV）和转E基因（TP）植株茎与叶中的纤维素含量，结果如下图所示。实验表明，E基因过量表达后，番茄纤维素含量（“显著”或“不显著”）提高。据此推测，E基因可能通过促使茎和叶片细胞的增厚，进而增强番茄对灰霉菌的抗性。
（注：“*”表示差异性显著）
【考点】
基因工程的操作程序（详细）;
植物细胞工程的应用;
能力提升
