请回答:
根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了、限制酶识别序列。
限制酶及识别序列
引物名称及序列(5'+3')
EcoRI
5'GAATTC3'
引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG
PstI
5'CTGCAG3'
引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT
GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG
XbaI
5'TCTAGA3'
PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。
A.以DNA为模板的RNA B.以RNA为模板的RNA
C.以DNA为模板的DNA D.以RNA为模板的DNA
经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。
重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?。
A.调整电泳的时间
B.调整指示剂上样量
C.调整加样孔朝向正极
D.调整电泳仪电压和温度
E.调整凝胶中琼脂糖的浓度
利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过和,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)
①单引物PCR1过程中,假设原始质粒有n个,每循环一次产生个双链DNA,循环30次需要个引物F。
②与QuickChange定点突变技术相比,单引物PCR除了能解决第(3)问中的不足,还存在的优点是
分步实验目标
简易操作、结果、分析
PCR鉴定正向重组质粒Y-M(图Ⅱ中融合片段M中有白色的箭头,代表方向)
①选择图Ⅱ引物; ②PCR目的产物约为bp。
确保M及连接处序列正确,Y-M的连接处上游含有Hind III+EcoR V的识别序列,下游含有EcoR V+BamH I的识别序列
③质粒测序,图Ⅲ中正确的是(选填序列编号)
检测融合蛋白定位
④对照质粒Y-GFP(仅表达GFP)与实验质粒Y-M分别导入细胞,发现对照组整个细胞均有绿色荧光,而实验组荧光集中在纤毛基部,说明。