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1.  石油对土壤的污染不仅给周边生态环境带来严重的损害，还严重影响居民的健康生活，且污染物含量越多。降解难度越大。为解决石油污染问题。某科研小组用了将近 1年的时间，从长庆油田中被石油污染最严重的土壤中分离出了高效分解石油的细菌。如图所示。回答下列问题∶

(1) 配制好的培养基通常可以使用法灭菌。步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中以为唯一碳源。在微生物学中，将的培养基称为选择培养基。
(2) 倒平板冷却后，需要倒置，目的是。
(3) 进行过程④之前，常需要检验培养基平板灭菌是否合格，方法是。
(4) 常采用法对石油分解菌进行分离和计数。该接种方法可计数的原理是。
【考点】
微生物的分离和培养; 培养基概述及其分类; 灭菌技术;
【答案】

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1. 淡水与海洋水体富营养化程度的日益加剧，使有害藻类爆发日趋频繁，严重影响了水域生态系统的安全，微生物控藻技术利用微生物来控制蓝藻引起的水华。某研究团队以某种蓝藻为研究对象，从水体中分离获得具有溶藻作用的溶藻菌，并进行了相关研究。回答下列问题：
(1) 在淡水或海水的水体中取水样，将水样处理后接种于经法灭菌的BPM培养基中。培养至浑浊，说明培养基中有菌体生长。经实验证明，获得的菌体有溶藻效果，将其取名为溶藻菌A。
(2) 培养基中的N是微生物合成（答出2种即可）等物质所必需的元素。将所得的溶藻菌A以法接种在BPM固体培养基上，倒置培养一段时间。
(3) 16SrDNA基因存在于所有细菌中，该基因中多个恒定区和可变区交替排列，恒定区序列基本保守，已从其他已知细菌中获取恒定区序列信息，可变区序列具有物种的特异性。为鉴定溶藻菌A所属类群，利用序列设计引物，PCR扩增其16SrDNA序列并测序，从水平确定其为假交替单胞菌属。
综合题 普通
2. 某研究小组从黄色短杆菌(能合成L-亮氨酸)中筛选L-亮氨酸缺陷型(不能合成L-亮氨酸)突变菌株，实验流程如图所示。回答下列问题：

   

(1) 培养基灭菌常用的方法是。
(2) 过程①的接种方法是。过程②接种时，先将灭菌后的金丝绒与培养皿A中的菌落接触一次，然后像盖印章一样将菌种连续接种到培养皿B和C的培养基表面，这种接种方法便于将来比较B、C培养皿中菌落的差异，原因是。
(3) 培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基，原因是。若培养皿B的培养基中含有L-亮氨酸，培养皿C的培养基中不含L-亮氨酸，培养一段时间后菌落生长情况如图所示，研究人员应该从培养皿(填“B”或“C”)中选取目的菌落，确定目的菌落位置的依据是。
综合题 普通
3.

某污水处理厂欲处理一批含As3+和硝酸盐浓度较高的污水，研究人员通过对肠道微生物的分离与筛选，得到了耐砷的反硝化细菌，它在厌氧条件下能够将硝酸盐还原为N2O和N2。分离耐砷的反硝化细菌具体步骤如下：

采集健康人体的新鲜粪便样本。

（1）配制培养基以筛选：该培养基中含有适宜浓度的，从而有利于该菌的生长，抑制其他微生物的生长。此种培养基属于培养基。

接种：取采集的人体新鲜粪便样品0.3g，接种至该培养基上。

（2）耐砷反硝化细菌的分离与纯化：取200～300μL上述培养液，均匀地涂布在已经添加了5mmol/Las3+和10mmol/LNO3-的细菌固体培养基上。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；涂布完成后，将平板置于温度为37℃的恒温培养箱中培养24h。挑取长势比较良好、形态大小不同的菌落利用平板划线法进行分离纯化，用该种方法进行接种时，接种工具是，该接种工具的灭菌方法是。操作时，在第二次及其以后的划线时，总是从上一次划线的开始划线，目的是。
综合题 普通