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1. 某研究小组进行了稻田固氮解磷解钾筛选及其复合菌剂对土壤培肥作用的系列实验。
(1) 菌株筛选：从土壤中筛选出具有固氮、解磷和解钾能力的3种菌株A，B，C，需选用的培养基分别为下表中的。

类型

组成

甲

甘露醇、KH2PO4、NaCl、MgSO4、CaSO4、CaCO3、pH7.2

乙

蔗糖、NaH2PO4、（NH4）2SO4、FeCl3、CaCO3、钾长石粉、pH7.2

丙

葡萄糖、NaCl、KCl、MgSO4、（NH4）2SO4、Ca3（PO4）2、pH7.2

注：钾长石粉是富钾的铝硅酸盐矿物制成的粉末，其主要化学成分为SiO2、K2O、Al2O3、CaO等
(2) 菌株鉴定：将上述筛选出的菌株用法分别接种到固氮、解磷和解钾培养基培养，观察菌落的等特征，对菌株进行种属鉴定。
(3) 复合菌株拮抗实验：将3种菌液混合培养。计数各阶段各菌株数量。简要写出测定活菌数的实验思路
(4) 复合菌剂接入水稻土壤及移栽发芽种子，水稻苗生长及生物量等情况见下表。实验中，添加腐熟牛粪的原因可能是，实验可得出的结论是

处理

苗长（cm）

鲜重（g/株）

千重（mg/株）

复合菌剂+腐熟牛粪

14.6

0.355

32.6

腐熟牛粪

13.1

0.263

24.3

空白对照

11.9

0.204

18.1
(5) 将复合菌剂用于农业生产，其优越性是（写出一点即可）
【考点】
微生物的分离和培养;
【答案】

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实验探究题 普通
能力提升
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1. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
(1) 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号

①

②

③

④

物品

培养基

接种环

培养皿

涂布器

灭菌方法

高压蒸汽

火焰灼烧

干热

臭氧
(2) 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。
(3) 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
(4) 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

实验探究题 普通
2. 随着我国畜禽产业迅猛发展，废弃羽毛亟需进行有效开发利用。
(1) 羽毛中含有丰富的角蛋白，不易被化学试剂分解，但自然界中少有羽毛长时间积聚，这一现象提示在的环境中易找到羽毛分解菌。
(2) 为筛选土壤中的羽毛分解菌，研究者进行如下操作：

①取土样→配置浓度梯度土壤溶液→涂布于基础培养基表面，培养一段时间后，挑取单菌落接种于的液体培养基中振荡培养。此过程使用的培养基用法灭菌，羽毛煮沸消毒并烘干。

②以为对照，观察羽毛降解情况并检测角蛋白酶的酶活，结果如下表。

菌株

A

B

C

D

对照

羽毛降解情况

酶活相对值

3

10

8

2

0

据表判断，适合后续研究的菌株及依据。
(3) 为优化角蛋白酶的生产条件，研究者利用响应面法进行了多变量分析。首先选择起始pH、温度、培养基中羽毛含量三个变量分别进行实验。依据相关软件推荐的不同变量组合实施多变量实验，并根据实验结果绘制了每两种变量组合对角蛋白酶活影响的三维图，部分结果如图。

图中投影的等高线反映了不同条件下角蛋白酶活的变化。由图可知：等高线中最小图形的中心点代表时的温度和羽毛含量；等高线酶活随温度和羽毛含量增加的变化趋势（“相同”或“不同”）。等高线若为圆形，提示两个变量间交互作用弱，据图判断，温度与羽毛含量间。根据测定结果建立模型，计算出最优组合，并进行验证，测得角蛋白酶活比优化前提高了数倍。
(4) 该研究潜在的应用前景是发酵液中富含氨基酸可用于。
实验探究题 困难
3. 堆肥是畜牧业和农业废弃物处理最佳方式之一，可将粪便及秸秆中的纤维素资源转化为可被利用的肥料。某研究小组按照下列流程图从香菇样本中分离到了高效降解纤维素的细菌菌株，该菌株还具有一定的固氮能力。

回答下列问题：

(1) 从功能上分析，C培养基属于培养基，在A、B培养基上生长的某些细菌都能分泌。
(2) 刚果红染色实验中，接种菌株后在纤维素分解菌周围会形成透明圈，若需挑选高效分解纤维素的菌株，应挑选出的菌落。刚果红实验的原理是。
(3) 筛选出的菌株用于堆肥后，肥料可用于还田，其意义是（答出两点即可）。
(4) 为验证该菌株是否具有固氮能力，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：。
实验探究题 普通