产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

1. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

(1) 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在3个固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46、43、52个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌。根据该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，其原因是。

(2) 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落、纯化后获得A、B两突变菌株。

(3) 在筛选产脂肪酶酵母菌株的培养过程中，某同学认为应在培养基上接种样品后，还要用空白培养基做对照，他的设计目的是。

(4) 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据下图分析，应选择菌株进行后续相关研究。

【考点】

测定某种微生物的数量;

【答案】

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实验探究题困难

1. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题；

(1) 步骤①土样应取自当地（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是；步骤③将土壤悬浮液稀释了倍。

(2) 步骤④所用的接种工具是，若在④的平板上统计的菌落的平均数量为126个，则每克土壤中含有的固氮菌为个

(3) 研究发现圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌处理厨余垃圾废液效果很好，为研究这两种菌种处理某餐厨垃圾废液的最佳接种量比，研究者将两种菌液进行不同配比，分别接种于等量相同餐厨垃圾废液中。培养3天后测定活菌数，取一定量菌液进行，然后分别取0.1mL的菌液采用法接种于完全培养基中培养，并选取菌落数在范围内的平板计数。实验结果如下图所示，由实验结果可知两菌种接种量比例为时，废液中两种菌种的有效活菌数能够实现同步最大化。

实验探究题困难

2. 如图表示研究者从土壤中筛选分解尿素的细菌并计数的相关实验，请据图回答下列问题：

(1) 进行过程①和②的目的分别是和；图中弧线箭头上“?”的具体操作是。

(2) 进行培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是。倒平板时，待平板冷却凝固后，应将平板放在恒温箱中，并用记号笔在皿底上标明培养微生物的名称、平板上培养样品的稀释度、制作者姓名、培养日期及等信息。纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是和。

(3) 研究者可以通过观察培养形成的菌落的、隆起程度等特征，来判断培养基上是否感染了其他细菌。在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止。

实验探究题普通

3. 我国饮用水卫生标准规定每毫升水样中细菌总数不得大于100个，大肠杆菌不得检出。某兴趣小组为测定本地自来水中的细菌总数和是否有大肠杆菌，进行了如下实验：

①分别配制营养琼脂培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCI、琼脂、H₂O）和伊红美蓝培养基（成分：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红、美蓝、H₂O），灭菌。

②取水样。

③先测定甲项指标：用灭菌吸管吸取ImL水样，涂布到营养琼脂培养基中；置于37 ℃培养24h后进行菌落计数。另设一个不加水样的空白对照组。

④用滤膜法测定乙项指标，装置和操作如下图。

回答下列问题：

(1) 步骤②取水样前应先将自来水龙头用火焰灼烧3min，目的是。

(2) 步骤③测定的指标甲是。水样涂布前无需稀释，理由是。

(3) 步骤④测定乙项指标，主要观察滤膜上是否会出现色菌落。配制伊红美蓝培养基时，先用蛋白胨、NaCl、琼脂配制基础培养基，在l00kPa、121℃条件下灭菌后，冷却至60^。C左右，再加入经70kPa、115℃条件下灭菌的乳糖、伊红、美蓝水溶液，后者灭菌条件不同的原因是。

(4) 兴趣小组认为合格的自来水中细菌数量很少，担心检测不到，因而将取得的水样先加入到无琼脂的营养培养液中培养一段时间后，再稀释涂布平板计数。这样操作获得的数据（填“可信”或“不可信”）.理由是。

实验探究题普通