某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。实验所用的培养基成分如下。培养基Ⅰ：K2HPO4 ， MgSO4 ， NH4NO3 ，石油。培养基Ⅱ：K2HPO4 ， MgSO4 ，石油。操作步骤： ①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液； ②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。回答下列问题。

1. 某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。

实验所用的培养基成分如下。

培养基Ⅰ：K₂HPO₄ ， MgSO₄ ， NH₄NO₃ ，石油。

培养基Ⅱ：K₂HPO₄ ， MgSO₄ ，石油。

操作步骤：

①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；

②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。

回答下列问题。

(1) 实验所用培养基中作为碳源的成分是。培养基中NH₄NO₃的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成（答出2种即可）等生物大分子。

(2) 步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N₀个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是。

(3) 为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是。

菌株	透明圈大小
菌株	平板Ⅰ	平板Ⅱ
A	+++	++
B	++	-

(4) 现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是，理由是。

【考点】

微生物的分离和培养; 培养基对微生物的选择作用;

【答案】

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实验探究题困难

1. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

(1) 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

(2) 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

(3) 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

(4) 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

实验探究题普通

2. 乐果是一种广泛使用的有机磷农药，对被乐果污染的土壤进行微生物修复一直是科学家研究的热点。现在从土壤中筛选能有效降解乐果的微生物，请回答下列问题：

(1) 用于筛选的样品应来自的土壤。为避免杂菌污染，取样和稀释土样时应注意：。

(2) 微生物驯化是指在培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，得到对此种物质耐受或能降解此种物质的微生物的过程。该实验中，所用驯化培养基中含有蛋白胨10g、氯化钠1g、磷酸二氢钾1g、水1L、葡萄糖1g和不同浓度的乐果。上述驯化培养基按功能分属于培养基。培养基冷凝后要将平板倒置，既可防止，又可避免培养基中的水分快速挥发。驯化后含有微生物的菌液通过法进行接种，从分离得到的单菌落中挑取待筛选的菌株。研究人员通常根据菌落的特征来初步区分不同种的微生物。

(3) 若要进一步鉴定不同种的待测菌株对乐果的降解能力，请写出简要的实验思路：。

实验探究题普通

3. 乳酸菌在细胞代谢过程中会分泌细菌素、有机酸等物质，细菌素对多种食品中常见的致病菌具有广谱的抑菌活性。实验小组为了检测细菌素的抗菌活性，将富集培养后的乳酸菌菌株分离纯化，并接种到MRS液体培养基中。回答下列问题：

(1) 纯化乳酸菌可以用平板划线法，该方法所用的接种工具是，对该工具进行灭菌的方法是。

(2) 利用平板划线法纯化乳酸菌时，第二次及其后的划线都要从上一次划线的开始，目的是。平板划线法不能用于微生物的计数，其原因是。

(3) 用打孔法测定乳酸菌分泌的细菌素对指示菌的抑菌效果时，应该先吸取稀释的菌液涂布到平板中，再使用5mm直径的打孔器打孔，每孔分别注入离心后的50μLMRS液体培养基的（填“上清液”或“沉淀物”）。培养24h后测定抑菌圈的直径，当抑菌圈的直径至少大于才能判断为具有抑菌活性。

(4) 实验小组用经乳酸调节pH至3.5（与发酵48h后发酵液的pH相同）的MRS液体培养基作为空白对照组，观察其抑菌情况。设置该组实验的目的是。

实验探究题普通