某研究团队拟从餐厨垃圾中分离具有高效降解能力的微生物，并制成菌制剂，用于餐厨垃圾高效无害化处理。设计实验如下：步骤一：取一定量的餐厨垃圾样品，筛除大块杂质后，装入无菌袋中密封，备用。步骤二：配制用于培养菌种的培养基，配方如下：成分蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂含量（g/L） 10 15 10 5 步骤三：制备样品稀释液，并将不同浓度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养，48h后观察结果。步骤四：对20种菌种进行分离纯化。为了比较这些菌种对餐厨垃圾的降解效果，分别配制含有餐厨垃圾主要成分（淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素）的培养基，分别用于测定各菌种对其主要成分的降解效果，并进行测定。图表示其中4种菌种（X1-X4）在淀粉培养基上的培养结果，表3为这四种菌的测定结果。四种菌种对餐厨垃圾各成分的降解系数菌种编号淀粉（D/D0）蛋白质（D/D0）脂肪（D/D0）纤维素（D/D0） X1 2.26±0.20 2.26±0.08 1.06±0.05 1.17±0.05 X2 1.90±0.08 1.90±0.08 1.10±0.09 1.05±0.11 X3 1.78±0.05 1.78±0.19 1.20±0.11 3.13±0.26 X4 2.09±0.07 2.09±0.08 2.10±0.02 2.39±0.14 备注：降解系数（D/D0）越大，降解效果越明显。

1. 某研究团队拟从餐厨垃圾中分离具有高效降解能力的微生物，并制成菌制剂，用于餐厨垃圾高效无害化处理。设计实验如下：

步骤一：取一定量的餐厨垃圾样品，筛除大块杂质后，装入无菌袋中密封，备用。

步骤二：配制用于培养菌种的培养基，配方如下：

成分	蛋白胨	牛肉膏	氯化钠	琼脂
含量（g/L）	10	15	10	5

步骤三：制备样品稀释液，并将不同浓度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养，48h后观察结果。

步骤四：对20种菌种进行分离纯化。为了比较这些菌种对餐厨垃圾的降解效果，分别配制含有餐厨垃圾主要成分（淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素）的培养基，分别用于测定各菌种对其主要成分的降解效果，并进行测定。图表示其中4种菌种（X1-X4）在淀粉培养基上的培养结果，表3为这四种菌的测定结果。

四种菌种对餐厨垃圾各成分的降解系数

菌种编号	淀粉（D/D₀）	蛋白质（D/D₀）	脂肪（D/D₀）	纤维素（D/D₀）
X1	2.26±0.20	2.26±0.08	1.06±0.05	1.17±0.05
X2	1.90±0.08	1.90±0.08	1.10±0.09	1.05±0.11
X3	1.78±0.05	1.78±0.19	1.20±0.11	3.13±0.26
X4	2.09±0.07	2.09±0.08	2.10±0.02	2.39±0.14

备注：降解系数（D/D0）越大，降解效果越明显。

(1) 根据配方可知，该培养基属于 A. 固体培养基 B. 液体培养基 C. 通用培养基 D. 选择培养基

(2) 在涂布过程中需要用到的工具有 A. 无菌圆纸片 B. 无菌玻璃刮铲 C. 酒精灯 D. 接种环 E. 无菌滴管

(3) 培养后，培养基上长出了35个菌落，通过观察菌落的，可初步判断是20种不同的菌种。为进一步确定菌种类型，还需从分子水平进行的检测方法是。

(4) 写出图所示的测定菌种对淀粉降解效果的实验原理：。

(5) 根据表中数据判断，降解餐厨垃圾能力最强的菌种是。

【考点】

微生物的分离和培养; 微生物发酵及其应用; 灭菌技术;

【答案】

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实验探究题困难

1. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

(1) 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

(2) 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

(3) 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

(4) 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

实验探究题普通

2. 随着科技的发展，生物降解有机化工物质已成为解决环境污染的一种重要手段。氯苯（C₆H₅Cl）是一种有机化工物质，不易降解，传统手段一般会做土壤掩埋处理，但会污染环境。某实验小组欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物，为解决氯苯的污染问题提供理论依据。回答下列问题：

(1) 为了获得能降解氯苯的微生物菌种，可在取样，并应选的培养基进行选择培养。除此之外，培养基中一般还应含有、无机盐和蒸馏水等。

(2) 在对目的微生物分离纯化时，所用接种方法必须使用接种环的是法。若用该方法进行接种，则一般在处获取目的菌的单菌落。

(3) 在用液体培养基培养降解氯苯的微生物时，需要设置对照组验证培养基是否灭菌合格，则对照组的设置操作为。培养基的灭菌方法般为。

实验探究题普通

3. 某兴趣小组研究使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响，实验选用凉拌黄瓜、盐水虾、干锅树菇3道菜，每道菜均分为3盘，一盘使用公筷，一盘不使用公筷，还有一盘不食用，实验者分别使用公筷和不使用公筷吃3道菜，同一实验者吃同一道菜的次数必须相同，实验流程如图所示。请据图回答：

(1) 图示流程中，应使用对样品进行稀释，接种时所用的接种工具是。对培养基X进行灭菌时，通常使用法。

(2) 图中存在“冷藏”操作，进行该操作的目的是。实验结束后，培养基应进行处理再丢弃。

(3) 实验结果如表所示：

菜名	总菌数（cfu/kg）
	餐前	餐后
	餐前	公筷	非公筷	未食用
凉拌黄瓜	14000	16000	45000	14500
盐水虾	135	150	220	140
干锅茶树菇	30	45	530	40

结合生物学知识及常识分析，筷子上的微生物可能来自（答出两点）；与凉拌黄瓜组相比，盐水虾和干锅茶树菇两组的总菌数较少的主要原因是。基于上表和该兴趣小组的实验课题，可以得出的结论是。

实验探究题困难