1. 丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。某研究小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因—X基因,以提高丁二醇的产量。回答下列问题:
(1) 研究人员采用了PCR技术扩增X基因。此外,获取X基因的方法还有(答出1种)。
(2) PCR中使用的聚合酶属于(填写序号)。

①以DNA为模板的RNA聚合酶   ②以RNA为模板的RNA聚合酶   ③以DNA为模板的DNA聚合酶   ④以RNA为模板的DNA聚合酶

(3) 使用BamHI和SalI限制酶处理质粒和X基因,连接后导入大肠杆菌,并涂布在无抗生素平板上(如图所示)。在此基础上,研究人员为筛选出含目的基因的菌株进行了一系列操作:

I.在平板中添加(填“氯霉素”或“四环素”),但是能在添加了该抗生素的培养基中生长的大肠杆菌并不一定导入了含X基因的重组质粒。

Ⅱ.实验人员利用影印法,让一块无菌丝绒布接触含有大肠杆菌菌落的平板的表面,使之   定位沾上菌落印迹,然后平移并压在含四环素的培养基上,培养至菌落显现。导入了含X基因的重组质粒的大肠杆菌菌落应该从含(填“氯霉素”或“四环素”)的培 养基中获取,理由是

【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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