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1. 人血清白蛋白（HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，在维持血浆渗透压、抗凝血等方面起着重要作用，具有重要的医用价值。如图是用基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。请据图分析并回答下列问题。

(1) 获取的HSA基因可以利用技术进行快速扩增，这项技术需要用到酶，该酶能够使脱氧核苷酸从引物的端开始连接。
(2) 构建基因表达载体时，需要用到的工具酶是，启动子在基因表达载体中的作用是，选择水稻胚乳细胞蛋白基因的启动子，而不用HSA基因的启动子，目的是。
(3) 为了提高Ⅰ过程的导入成功率，通常用处理农杆菌，使其细胞处于的生理状态。
(4) 为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA，可以用方法来进行检验。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因工程的操作程序（详细）;
【答案】

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实验探究题 普通
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1. 干扰素是动物体内的一种糖蛋白，可用于治疗病毒的感染和癌症。中国干扰素之父侯云德院士利用基因工程的方法获得了人干扰素，请回答问题：

   

(1) 获取干扰素基因的方法之一是从已被病毒免疫的白细胞中提取mRNA，在 酶的作用下合成cDNA，再利用PCR技术扩增。PCR反应体系中加入Mg2+ ， Mg2+的作用是。PCR反应过程中温度最低的步骤是。PCR反应体系中第五轮循环需要消耗引物2的数量是个。
(2) 为了让干扰素基因正确连接到PET-28质粒中，应在引物的(填“5'”或“3'”)端加入限制酶 的识别序列。
(3) 人干扰素在体外保存相当困难，研究发现是由于干扰素第17位的半胱氨酸影响了第31位和第141位2个半胱氨酸之间二硫键的稳定，若将第17位的半胱氨酸替换成丝氨酸，可使人干扰素结构稳定，且不影响生理功能。根据上述信息，若要获得在体外能 保存较长时间的人干扰素，你的实验思路是 。
实验探究题 困难
2. 基因工程是培育新品种花卉的一种重要技术手段。研究发现普通矮牵牛花因缺乏蓝色色素合成所需的转座酶而不能开蓝色花，研究人员从蔷薇花瓣细胞中分离提取的转座酶F35H基因转入普通矮牵牛中，获得蓝色矮牵牛新品种。回答下列问题：
(1) 从蓝色矮牵牛花瓣细胞中粗提取DNA时，加入酒精的目的是。对粗提取的DNA进行鉴定时，加入试剂后置于沸水中加热。
(2) 提取蓝色矮牵牛花DNA，获取F35H基因，并PCR扩增，已知F35H基因的两端碱基序列如下：

采用PCR技术扩增该基因，需要使用的引物1序列为5'-TCTGTTGAAT-3'，则引物2的序列为（标出：5'和3'端）。在PCR扩增仪中已加入了一定的缓冲溶液、F35H基因、Mg2+、Taq酶、两种引物，还需要加入的物质有。
(3) PCR扩增过程一般由变性、复性和延伸三步经多次循环完成。其中延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素：和。
(4) 扩增得到的PCR产物一般先通过对产物进行初步鉴定，如下图。F35H基因的大小约为990bp。结果显示，号样品具有阳性条带，且条带长度符合预期，即为成功导入F35H基因的植株。
实验探究题 普通
3. 如图所示，若在PCR反应体系中加入两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出）的探针，荧光探针和引物一起与模板结合，当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团和淬灭基团分离而发出荧光（每扩增1个DNA分子，就有1个荧光探针水解），图中①～③表示步骤。回答下列问题：

   

(1) PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：变性、、延伸。延伸的温度一般设定为；若DNA中G+C的含量越多，要求变性的温度越高，其原因是。
(2) PCR过程中引物的作用是。
(3) 在相同PCR循环次数条件下，荧光强度与模板数量（填“不相关”“呈正比”或“呈反比”）。若最初该反应体系中只有1个DNA分子模板，进行第4次循环时，需要消耗荧光探针个。
实验探究题 普通