长时间处于低O2高CO2环境下,人体会出现记忆功能减退甚至认知障碍,研究发现海马细胞凋亡可能是脑功能损害的重要原因之一。p38 MARK属于应激激活的蛋白激酶,参与了多种因素所致的神经细胞凋亡;而caspase-3是最重要的凋亡蛋白酶之一,是多种凋亡途径的共同下游部分。为进一步探究p38 MARK与caspase-3在海马细胞凋亡过程中的作用机制,科研人员建立长期低O2高CO2小鼠模型,观察海马细胞凋亡以及p38 MAPK、caspase-3活性情况。
①对海马凋亡细胞进行荧光标记,荧光显微镜观察。结果如图甲,推测图(填“A”或“B”)为实验组的镜检结果。
②蛋白裂解液提取海马细胞总蛋白,利用蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,经电泳后加入的单克隆抗体和β内参蛋白,化学发光检测试剂反应5min后进行感光、显影(如图乙),利用定量软件读取p38 MAPK及β内参蛋白条带的光密度值。p38 MAPK条带光密度和β内参蛋白条带光密度比值可代表p38 MAPK的相对蛋白含量,由此推测β内参蛋白的作用是。实验结果表明实验组p38 MAPK的相对蛋白含量较对照组明显增加。
③测定海马组织中caspase-3活性,结果显示实验组caspase-3活性较对照组有明显增加,进一步在水平证明了模型小鼠的海马组织存在神经细胞的凋亡。基于本研究的结果,可推测长时间处于低O2高CO2环境下引发海马细胞凋亡的机制可能是。