1. 人血清白蛋白(HSA)在维持血浆渗透压、抗凝血等方面起着重要作用,具有很高的医用价值。图1所示为以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的三条途径,图2表示途径Ⅱ所用质粒的结构。

   

请回答下列问题:

(1) 获取的HSA基因可利用PCR技术扩增HSA基因,PCR技术的原理是。这项技术需要用到酶,该酶能够使脱氧核苷酸从引物的端开始连接。
(2) 由图2可知,在构建基因表达载体时,为避免目的基因(其两端的酶切位点可通过PCR添加)反向接入,最好选用的限制酶是。启动子在基因表达载体中的作用是。途径Ⅲ构建基因表达载体时应选择山羊膀胱上皮细胞特异性表达基因的启动子,而不用HSA基因的启动子,目的是
(3) 为了提高途径Ⅰ和Ⅱ过程的导入成功率,通常用离子处理受体菌,使其细胞处于的生理状态。途径Ⅲ通过的方法,导入山羊的中,然后使其生长发育成转基因动物。为了获得更多的转基因山羊,科学家常采用技术。
(4) 人体合成的初始HSA多肽,需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与图2中途径Ⅱ相比,选择途径Ⅰ和Ⅲ获取rHSA的优势是
(5) 为了鉴定宿主细胞是否产生rHSA,可以用技术来进行检验。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 胚胎分割; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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