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1. 多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fatl，培育转fatl基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。据图回答下列问题：

(1) 用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、（答出2点）等。
(2) 由图可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化，即线性DNA的末端相互连接形成圆环，以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用和。
(3) 构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是。除GFP基因外，未标注出的必需元件还有。
(4) 猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期，以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为。此过程中，对于悬浮培养的细胞直接用法收集细胞处理成细胞悬液。
(5) 经检测，fatl基因成功整合在猪基因组DNA后，不能说明成功培育转基因猪，还需要。
【考点】
动物细胞培养技术;
【答案】

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1. 紫杉醇是一种从红豆杉树皮中分离提纯的天然抗癌药物。为快速检测紫杉醇，研究人员利用细胞工程技术制备了抗紫杉醇单克隆抗体，制备过程如图所示。回答下列问题：

   

(1) 抗紫杉醇单克隆抗体的获得所涉及的生物技术有。
(2) 过程①用化学方法诱导融合时可选用，能得到类两两融合的细胞。
(3) 为获得杂交瘤细胞，应用特定的选择培养基对细胞甲进行筛选，然后通过专一抗体检测和克隆化培养获得的杂交瘤细胞。若要在体外培养液中培养筛选的杂交瘤细胞，需要将培养液放置在95%空气和5%CO2的培养箱中培养，CO2的作用是。
(4) 紫杉醇是红豆杉产生的一种代谢产物，欲利用植物细胞培养获得大量的紫杉醇，应将红豆杉的外植体培育到愈伤组织阶段，原因是。研究人员用少量果胶酶处理红豆杉愈伤组织获取单细胞，由愈伤组织培养阶段转入细胞悬浮培养阶段。悬浮培养基为液体培养基，更有利于细胞的生长，原因是。据下图分析，为使紫杉醇总产量最高，图中最适合的2，4-D浓度应为mg/L。

   
综合题 普通
2. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（eTnT）、肌钙蛋白（cTnl）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnl在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标，为制备抗cTal的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程，请据图分析回答下列问题：

   

(1) 动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的等天然成分，以满足动物细胞培养的营养需要。动物细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是。
(2) 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的。为了防止有害代谢物的积累，可采用的方法，以便清除代谢物。
(3) 从经过免疫处理的小鼠脾脏中获得的浆细胞群能合成、分泌（选填“一种”或“多种”）抗体。
(4) 甲、乙、丙中，只含杂交细胞的是，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行克隆化培养及，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得。
综合题 普通
3. 为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。

回答下列问题：

(1) 上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是。
(2) 写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：。
(3) 为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于；图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是。
(4) 若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有（答出2点即可）。
综合题 普通