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1. 某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。

Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制备，流程如图1

(1) 构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体（填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”）。
(2) 质粒在包装细胞内组装出由组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。

Ⅱ．N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2
(3) 用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体的中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。
(4) 用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行培养。用技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集，提取单克隆抗体。
(5) 利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成，实现特异性治疗。
【考点】
动物细胞培养技术; 单克隆抗体的制备过程; 单克隆抗体的优点及应用; 基因工程的操作程序（详细）;
【答案】

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综合题 困难
能力提升
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1. 在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，主要分为单克隆抗体治疗和过继性细胞治疗两类，其中过继性细胞治疗相关过程如图所示。回答下列问题：

(1) 在单克隆抗体治疗中，为了获取能产生抗肿瘤细胞的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。筛选所用的培养基属于（按功能）。筛选出来的杂交瘤细胞进行和才可以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
(2) 科学家将细胞毒素与单克隆抗体结合，制成了抗体—药物偶联物（ADC），ADC通常由三部分组成。
(3) 过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞能够特异性地识别并处理肿瘤细胞，该种细胞是，将分离出来的免疫细胞进行诱导培养，但培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
(4) 过继性细胞治疗能有效避免免疫排斥，其原因是。
综合题 困难
2. 犬细小病毒（CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率也高。利用小鼠制备抗CPV单克隆抗体的基·本流程如图所示。回答下列问题：

(1) 制备单克隆抗体依赖的生物学技术有和。步骤①中，用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是。
(2) 经过步骤②后获得的是多种类型的杂交细胞，原因是。对杂交细胞用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行，经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。
(3) 体外培养杂交瘤细胞后从培养液中提取到抗CPV单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养液中有各种营养物质，还需要添加以补充细胞生长所需的未知营养物质。
(4) 对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行检测。
综合题 普通
3.  2023年诺贝尔生理学或医学奖获得者主要贡献为mRNA疫苗技术及其在抗击COVID-19疫情中发挥的有效作用。疫苗是通过抗原诱导免疫系统获得保护性的生物制品，疫苗研发技术路线还有灭活疫苗、弱毒疫苗、重组蛋白疫苗等。回答下列问题。
(1) 病毒是一种严格寄宿在细胞中生存的生命形式，实验室增殖病毒首先要培养细胞。在体外培养动物细胞时，使用合成培养基通常需要加入，培养所需气体主要有为防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，需要定期更换。通过噬斑计算法可测定病毒滴度，假设在铺满贴壁细胞的细胞培养孔板中，接种1：10稀释度的病毒液10L，固定染色后计算噬斑数（噬斑形成单位，PFU）为60，则该孔病毒的滴度测量值为PFU/mL
(2) 我国通过实施计划免疫成功消灭脊髓灰质炎，“人民科学家”顾方舟率领团队研制的脊髓灰质炎活病毒疫苗“糖丸”，从技术路线上属于。
(3) 在病毒感染细胞时两者表面相互接触，为了更好地被免疫细胞所识别，在设计mRNA疫苗时，病毒抗原优先选取。
综合题 普通