金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是水体中常见的威胁人类健康的致病菌。研究者为探究枯草芽孢杆菌对这两种病原体的抑制效果，研究者设计了相关实验。请回答下列问题：实验一：从不同环境中筛选枯草芽孢杆菌（1）从不同环境中取样进行扩大培养，培养时采用摇床震荡，可知枯草芽孢杆菌为（填“厌氧”或“好氧”）微生物。培养过程中抽样检测活菌数时，应采用的计数方法是（填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”），其计数原理是，不选用另一种计数法的原因是。实验二：检测不同类型的枯草芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用（2）取适量金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的菌液分别涂布于固体培养基上，该操作过程中防止杂菌污染的措施有（答出两点）。（3）将无菌滤纸片在6种（编号为1-6）培养过不同的滤液中浸泡相同时间后，分别覆盖于上述固体培养基上（如图所示），培养后测量抑菌圈（图中黑色区域）的大小以判定抑菌效果；据图分析最好选择图中（填数字）所示的菌种用于水质净化。左为金黄色葡萄球菌，右为大肠杆菌

1. 回答下列生物技术实践相关问题：

菌株	菌落直径/mm	透明圈直径/mm
A	18	36
B	31	59
C	19	57

（1）研究小组为了从土壤中筛选出淀粉分解菌，将土壤稀释液涂布在合适的培养基上培养形成菌落，为研究其分解淀粉的能力，测量了菌落和透明圈直径。测量时应（选填“打开皿盖测量”“直接在皿盖上测量”或“直接在皿底测量”）。结合表1分析得到，分解淀粉能力最强的菌株是。

（2）在制作果汁时，为了增加出汁率和澄清度，常加入果胶酶。研究发现，当果胶酶的使用剂量超过一定值后，果汁澄清度反而下降，这是使果汁变浑浊的物质是。工业化生产时，往往将酶固定化处理，该技术的优点是。

（3）泡菜腌制过程中若泡菜坛有沙眼，常导致腌制的蔬菜臭而不酸，其原因可能是。某同学欲用新鲜的泡菜液分离纯化乳酸菌，应首先用对泡菜液进行梯度稀释，须进行梯度稀释的原因是。

综合题容易

1. 磷是植物生长的重要元素，施入土中的磷大多数与Ca²⁺等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见下图，请回答下列问题：

(1) 经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则每克土样中的活菌数为个。运用这种方法统计的结果往往比实际值，原因是。

(2) 步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较的菌落。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据对细菌进行初步的鉴定和分类。

(3) 常采用法对高效解磷菌进行分离和计数，要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置作为对照。

(4) 为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基中，并在37℃、200r·min^-1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到曲线：

用摇床进行培养的好处是（写出两点）。结果表明最优良的解磷菌株是。

(5) 纯化菌种时，也可按下图所示接种方法，接种环需要灼烧次。

综合题普通

2. 大肠杆菌是引起急性肠胃炎的细菌之一。为有效治疗患者，需要检测大肠杆菌对抗生素的敏感性。可以按下图操作进行。回答下列问题。

(1) 检测水中大肠杆菌有如下部分操作：

①要检测水中大肠杆菌的数量，在培养皿上接种的方法是，该方法除可用于微生物计数外，还可用于。

②下图所示的四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到的是。

③统计上述样本菌落数的一般步骤是，这样操作的目的是。

(2) 将含有青霉素、利福平、庆大霉素等抗生素的滤纸片分别置于上述平板中的不同位置，培养一段时间后，结果如图所示。为了达到最好的抗菌目的，应选择的抗生素是。若透明圈中出现了一个菌落，出现该现象的原因可能是。

综合题普通

3. 豆瓣酱是我国传统发酵食品，发酵过程中利用了多种天然菌种。研究人员尝试分离这些菌种，进而研究它们在发酵中的作用。

(1) 研究人员用稀释豆瓣酱酱醅，得到菌液，然后用法将菌液接种在固体培养基表面，培养一段时间后，根据菌落特征初步选择出几种微生物：葡萄球菌S、解淀粉芽孢杆菌Ba、嗜盐四联球菌T和融合魏斯氏菌W。

(2) 为了检测抗生素对上述菌种的抑菌率，分别将这些菌种接种在含有不同种类、不同浓度抗生素的液体培养基内，并设置对照菌液和不接种菌的空白培养体系，在适宜条件下培养，定期检测菌液的吸光度（OD值）。已知菌液吸光度与菌体密度成正比。该实验中对照菌液组的处理方式与实验组的区别是，某实验组菌液抗生素抑菌率的计算公式为。

(3) 3种抗生素对上述微生物的抑菌率如下图所示。据图可知，向培养基中加入抗生素，控制其浓度为μg/mL，能够实现对嗜盐四联球菌T的选择培养。

综合题普通

1. 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如下图所示实验。下列叙述正确的是（）

A. 实验中接种至培养基方法是平板划线法 B. 菌株a和b需要的生长因子一定有所不同 C. 基本培养基出现的少量菌落一定是单个细菌形成的单菌落 D. 基本培养基中包含菌株a和b的生长因子

单选题普通

2. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述错误的是（）

A. 步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍 B. 步骤②需振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中 C. 步骤④所用培养基的特点是不添加氮源，需要将培养基调至中性或微碱性 D. 图中纯化培养采用了稀释涂布平板法，需用灭菌后的涂布器蘸取菌液进行涂布

单选题普通

3. 某检测小组为验证使用公筷的必要性，将聚餐时的每道菜品分为两份，一份使用公筷进食，一份不使用公筷进食。通过无菌操作采集样品，定量稀释后等量接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，恒温培养适宜时间，进行细菌菌落总数统计，结果如下表，（其中CFU/g表示每克样品在培养基上形成的菌落总数）。下列叙述正确的是（）

菜名	细菌菌落总数（CFU/g）
	餐前	餐后
	餐前	公筷	非公筷
凉拌黄瓜	14000	16000	45000
香辣牛蛙	60	150	560

A. 为了鉴别上述平板中的菌落是不是大肠杆菌，可配制含刚果红的培养基 B. 用未接种的牛肉膏蛋白胨培养基培养一段时间可检测配制的培养基是否被污染 C. 使用公筷能明显降低菜品细菌的污染，使用非公筷不会导致菜品间的交叉污染 D. 凉拌黄瓜餐前的菌落数远高于香辣牛蛙是由于黄瓜表面更容易携带菌体

单选题容易

1. 生物修复技术已变成对生态环境进行保护过程中的一类最有价值的修复手段，下图为从某植物根际土壤中筛选出高效石油降解菌的部分流程示意图，请据图回答：

(1) 用于培养石油降解菌的培养基在接种前需要通过法进行灭菌。步骤I为低温石油降解菌的富集培养。称取1g土壤样品加入预先装有100mL以为唯一碳源的培养基的三角瓶中，在15℃、160r/min的恒温振荡摇床中培养6d．在相同的培养条件下连续培养四个周期。摇床培养的目的是。

(2) 在操作II、III中，采用的接种方法分别是、。

(3) 研究人员通常根据菌落的特征来初步区分不同种的微生物，统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到时。

(4) 目前，已知有200多种微生物能降解石油，但多数微生物的降解速率都很低，现在分离筛选得到三株降解石油能力较强的菌株，请提出鉴定不同菌株降解石油能力大小的方法。

(5) 石油主要含有烷烃、环烷烃和芳香烃，科研人员已经筛选出分别降解三种烃类的细菌B、C、D（每种菌只含有一种相应的烃类降解酶）探究菌A高效降解石油的原因，凝胶电泳技术分离相关蛋白，结果如图：

①检测微管蛋白的目的是。

②依据实验结果分析菌A降解石油的能力强于菌B、C、D原因是。

综合题困难

2. ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，对人体无毒副作用，能在体内被酶解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验Ⅰ～Ⅴ表示过程，①～③表示菌落），已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。请分析回答：

(1) 图示过程1使用的接种方式为，与丁培养基相比，乙培养基成分的不同是。从功能角度分析，乙培养基属于培养基。

(2) 过程Ⅲ应使用（工具名称）挑选号菌落（选填序号），在培养基表面连续划线，目的是。

(3) 为检测收集到的ε-PL对不同微生物的抑制能力，从而选择合适的食品添加浓度。研究人员将大肠杆菌等微生物分别涂布于培养基表面，再将浸有不同浓度的ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区的宽度，得到表所示的结果。（注：“+”表示无清晰区，“-”表示未进行实验。）

清晰区宽度/mm 微生物	ε-PL浓度/mg·L^-1
清晰区宽度/mm 微生物	20	30	40	50	60	70
大肠杆菌	+	+	7.2	10.8	11.6	13.3
沙门氏菌	+	+	6.5	9.2	10.9	13.0
酿酒酵母	7.2	9.1	12.6	13.4	14.8	-
红曲霉	+	+	+	+	+	6.3

①该实验设计存在不完善之处，请提出一条修改建议：。

②结果显示ε-PL对的抑制作用最强，ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度呈。

(4) 实验筛选到的菌种经大规模发酵可大量生产ε-PL，以下说法错误的有______。 A. 发酵过程中采用稀释涂布平板法随时取样检测培养液中微生物数量 B. 选育出的菌种能直接用于大型发酵 C. 发酵过程需严格控制温度、pH和溶解氧等培养条件 D. 发酵产物ε-PL需从微生物体内提取、分离和纯化

实验探究题普通

3. 乳酸菌能产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，某兴趣小组从泡菜滤液中筛选出亚硝酸盐还原酶活力较高的乳酸菌，进行了相关实验。请回答下列问题：

(1) 乳酸菌生长繁殖所需要的主要营养物质有碳源、氮源、、四类，分离、纯化乳酸菌所用的选择培养基以亚硝酸盐为唯一氮源。选择培养基是指。

(2) 将筛选出的乳酸菌，用于泡菜制作过程，进行食盐用量与亚硝酸盐含量的探索实验，结果如图。

①泡菜制作过程中，pH呈下降趋势，原因是。

②据图可知，腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现的越早，且峰值较高，原因是。

(3) ①图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为个。运用这种方法统计的结果往往较实际值（填“偏大”或“偏小”），原因是。

②若要取以上稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是下图中的。

综合题普通