1. 黄瓜通过数千年的自然选择、人工选择的不断淘汰和改良,发展出现在的众多栽培品种。根据不同黄瓜果实的特性,在取食过程中,黄瓜嫩果果皮颜色成为一个重要的参考指标。
(1) 现用纯种黄瓜嫩果黄绿色果皮品系P1与黄瓜嫩果白色果皮品系P2进行杂交,F1再自交。所得F2表现型及比例如下表,据此判断,黄瓜嫩果果皮颜色由对等位基因控制,预计P2与F1杂交,后代表现型及比例约为

代系

F1

F2

表现型

黄绿色果皮

黄绿色果皮

浅绿色果皮

白色果皮

数量

全部

138

45

59

(2) 为确定决定白色果皮的基因在染色体上的具体位置,研究者将纯合嫩果白色果皮品系H4与绿色果皮品系Q1 杂交,F1表现为绿色,F2绿色果皮与白色果皮比例为3:1。SSR是染色体上的一段特异性短核苷酸序列,可作为基因定位的遗传标记。研究者在黄瓜的7条染色体上选择了179对SSR位点进行PCR。其中位于3号染色体的SSR15得到如下PCR电泳结果,见图1。据此判断,白色果皮基因(选填“位于”或“不位于”)3号染色体上。判断依据是

(3) 研究者最后锁定了Q88、Q4-2、SSR15、Q138以及Q400这5对多态性标记,为确定这五对标记与控制黄瓜嫩果果皮颜色基因的位置关系,利用这5对标记分别对F2代882株白色植株群体进行PCR验证。得到重组单株(PCR 结果与F1杂合个体一致)数量,如表。请在图2中补充几对标记和白色基因(w)的位置关系

标记名称Markers   name

重组单株数量Number   of   recombinant   piants

Q88

19

Q400

5

Q138

0

Q4-2

0

SSR15

4

(4) 根据上述实验,研究者将白色基因(w)定位在56kb的序列范围内,为了进一步确定w基因的位置和序列,下列证据中,支持某段序列作为候选基因的有_____。 A. 该段序列在绿色果皮品系中和白色果皮品系中存在差异 B. 定量PCR证明该序列转录量在绿色果皮品系和白色果皮品系中存在差异 C. 在绿色果皮品系中敲除该序列区域导致其表现白色 D. 在白色果皮品系中表达绿色果皮该段序列可导致其表现绿色 E. 该序列与果皮颜色基因紧密连锁 F. 该序列与叶绿体结构形成有关 G. 该序列定位在3号染色体上
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 基因在染色体上的实验证据; 遗传信息的转录; 遗传信息的翻译;
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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