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1. 滚管培养法是分离厌氧微生物的常用方法，其过程为：先将样品稀释液注入盛有50℃左右培养基的密封试管中，然后将试管平放于盛有冰块的盘中迅速滚动，带菌的培养基会在试管内壁凝固成薄层，培养一段时间后即可获得单菌落。研究小组按照如图所示流程分离反刍动物瘤胃中的纤维素分解菌。回答下列问题：

(1) Ⅰ过程所用培养基中（填“需要”或“不需要”）添加凝固剂。为了筛选可分解纤维素的微生物，在配制Ⅱ过程所用培养基时，应注意（从培养基成分角度分析）。Ⅲ过程可根据菌落特征来初步区分不同种类的纤维素分解菌，原因是。
(2) 实验中所用到的培养皿、试管和培养基等均需要进行灭菌处理。其中必须用湿热灭菌法进行灭菌的是，其不能使用干热灭菌法灭菌的原因有（答两点）。
(3) 为分析该动物瘤胃中纤维素分解菌的数量，研究小组在4个平板上，利用法各接种稀释倍数为103的上述纯培养菌液样品0.1mL，在（填“有氧”或“无氧”）条件下培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、50、54、56，则每升原菌液样品中纤维素分解菌的数量为。
【考点】
尿素分解菌的分离与计数; 纤维素分解菌的分离; 培养基概述及其分类; 灭菌技术;
【答案】

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实验探究题 普通
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1. 研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物。请就如何从土壤中获得纤维素分解菌回答以下问题。

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和酶。

（2）若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是，操作时采用的灭菌方法是。

（3）刚果红可以与纤维素等多糖形成色复合物，但并不与水解后的和发生这种反应。常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在时就加入刚果红。（第一种、第二种）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌。为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的进行定量的测定。
实验探究题 普通
2. 回答与“能分解尿素的微生物的分离与计数”实验有关的问题：
(1) 制备尿素固体培养基时，培养基冷却至60℃后，加入经G6玻璃砂漏斗通过方式快速灭菌得到的尿素溶液，用该灭菌方法的原因是。
(2) 将采集到的土样配置成细菌悬液后，将菌液分别涂布到LB固体培养基和尿素固体培养基，涂布接种后需要对玻璃刮刀进行灼烧，其目的是。在尿素固体培养基中有的菌落周围会有红色环带出现，这是由于。
(3) 能分解尿素的幽门螺杆菌与消化道疾病的形成密切相关，而乳酸菌可作为药物应用于清除幽门螺杆菌的感染。为筛选出抗幽门螺杆菌最强的乳酸菌，进行如下实验：将培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌后待时灭菌锅盖才能被打开。培养基倒入培养皿内，待冷凝后再将含幽门螺杆菌的培养基加到其上层。在培养基表面直接垂直放上已的牛津杯（圆形小管）后，再将3种乳酸菌的发酵液分别加入杯中，为防止液体渗漏牛津杯不能再移动，故培养时应注意，实验结果如下图所示，可见（编号）中的乳酸菌抑制作用最强。
实验探究题 普通
3. 农田生态系统属于人工生态系统，收获农产品导致农田生态系统不断向系统外输出物质，从而引起土壤贫瘠，不利于作物生长。研究小组计划通过施放由纤维素分解菌及自生固氮菌（能够独立进行固氮的细菌）组成的复合菌剂，促进回田的农作物秸秆等有肥料的分解，以改善土质和增加土壤氮元素。下表为该小组配置的两种培养基的配方，请回答下列问题：

培养基种类

培养基的配方

Ⅰ号培养基

CMC-Na、酵母膏、KH2PO4、琼脂、蒸馏水

Ⅱ号培养基

KH2PO4、NaCl、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水
(1) 根据配方分析，筛选自生固氮菌应该选择号培养基，理由是。
(2) 筛选和鉴定纤维素分解菌，需选择号培养基并添加。如果实验过程中没有污染和其他失误，经过多次选择培养，平板中都出现多种差异明显的菌落，这样的结果说明。选择某种纤维素分解菌（记为D）测定其降解农作物秸杆的能力，农作物秸秆主要为D提供。
(3) 不同类型微生物混合培养常会出现因相互抑制而在菌落周围出现透明圈的现象，为确定两种微生物是否适合联合施用，在完全培养基上均匀涂布纤维素分解菌，再在其表面接种自生固氮菌，适宜条件下培养一段时间后，观察。
(4) 经检测，实验室条件下降解效率很高的纤维素分解菌在实际环境中降解率却很低，可能的原因是。
实验探究题 普通